谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測試盒(比色法) 生化試劑
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谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測試盒(比色法),在 37℃及 PH7.4 條件下,作用于丙氨酸及α-酮戊二酸組成的底物,生成丙酮酸及谷-氨-酸。
谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測試盒(比色法)
(貨號:C009-1-1 比色法)
一、測定原理:
谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)在 37℃及 PH7.4 條件下,作用于丙氨
酸及α-酮戊二酸組成的底物,生成丙酮酸及谷-氨-酸。反應(yīng) 30min
后(固定時間)加入 2,4-二硝基苯肼(DNPH)鹽酸溶液,既中
止反應(yīng),同時 DNPH 與酮酸中羰基加成,生成丙酮酸苯腙。苯腙
在堿性條件下呈紅棕色,于 505nm 比讀吸光度并計算酶活力。
二、試劑的組成與配制:(100 管/50 樣)
試劑一:谷丙轉(zhuǎn)氨酶基質(zhì)液,50mL×1 瓶,4℃冰箱保存 6 個月;
試劑二:2,4—二硝基苯肼液,50mL×1 瓶,4℃冰箱保存 6 個月;
試劑三:4mol/L 氫氧化鈉液,50mL×1 瓶,室溫密封保存 6 個月;
0.4mol/L 氫氧化鈉液的配制:臨用時按 4mol/L 氫氧化鈉液:雙
蒸水=1∶9 的比例稀釋,需多少配多少,室溫密封保存。
試劑四:2mmol/mL 丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液 1 支,4℃冰箱保存 6 個月;
試劑五:0.1mol/L 磷酸鹽緩沖液 1 支,4℃冰箱保存 6 個月。
三、操作過程:
1、血清及細(xì)胞培養(yǎng)液的測定:直接取樣進(jìn)行測定。
四、注意事項:
1、比色法中常用的有賴氏(Reitman-Frankel)法及金氏(King)
法。賴氏法標(biāo)準(zhǔn)曲線所定單位數(shù),是用實驗方法和卡門氏分
光光度法(速率法)作對比測定求得的。以卡門氏單位報告
結(jié)果,比較準(zhǔn)確。卡門氏單位定義為:1mL 血清,反應(yīng)液總
容量 3mL,波長 340nm,1cm 光徑,25℃,1min 內(nèi)所生成的
丙酮酸,使 NADH 氧化成 NAD+而引起吸光度每下降 0.001
為一個單位(1 卡門氏單位=0.482 IU/L,25℃)。
2、一般血清標(biāo)本內(nèi)源性丙酮酸很少,個體相差也不大,作大
批標(biāo)本測定時,不需每份標(biāo)本都作對照管,嚴(yán)重脂血、黃疽、
溶血及陳舊血清須作自身對照管。建議對活力單位超過正常
尤其是在臨界時,進(jìn)行復(fù)測;復(fù)測時每份標(biāo)本均作對照管。
3、酶活力超過 150 單位時,用鹽水稀釋血清后重測。
4、應(yīng)將一般血清的對照管(或稱標(biāo)本空白管)的吸光度作為
日常質(zhì)控的指標(biāo)之一;如相差大,可考慮α-酮戊二酸濃度、
DNPH 濃度及儀器等原因引起。
5、血清中 ALT 在室溫(25℃)可保存 2 天,在 4℃可保存一
周,在-25℃可保存 1 個月。
附錄Ⅰ:ALT 標(biāo)準(zhǔn)曲線
1、操作表
【注】:標(biāo)準(zhǔn)曲線需要客戶自己制作才更準(zhǔn)確,操作步驟參照上
表;上表所列的卡門氏單位數(shù)值與各標(biāo)準(zhǔn)孔的標(biāo)準(zhǔn)品加
樣量是對應(yīng)的,所以該值固定不變,客戶可以由此值和
自己按操作表求得的各標(biāo)準(zhǔn)孔的吸光值作多項式曲線
(R 2≥0.99),得到計算公式用于樣本計算。
谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測試盒(比色法)