超氧化物歧化酶(SOD)分型測(cè)定試劑盒2
- 型 號(hào):
- 參考價(jià):0~0
超氧化物歧化酶(SOD)分型測(cè)定試劑盒2,對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用,此酶能清除超氧陰離子自由基(O2- ·)保護(hù)細(xì)胞免受損傷。
超氧化物歧化酶(SOD)分型測(cè)定試劑盒2
(抽提法測(cè) T-SOD 、CuZn-SOD、 Mn-SOD 比色法)
【試劑盒介紹】
本試劑盒采用黃-嘌-呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶
(Superoxide Dismutase SOD)活力,可測(cè)血清(漿)、腦脊液、胸水、
腹水、腎透析液、尿液、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、心肌培養(yǎng)
細(xì)胞、腫瘤培養(yǎng)細(xì)胞、各種動(dòng)植物組織細(xì)胞及亞細(xì)胞水平(線粒
體、微粒體)中的 SOD 活力,并可檢測(cè)微生物、藥物、食品、
飲料、化妝品中的 SOD 活力。
【測(cè)定意義】
超氧化物歧化酶(SOD)對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著
至關(guān)重要的作用,此酶能清除超氧陰離子自由基(O2- ·)保護(hù)細(xì)
胞免受損傷。
【測(cè)定原理】
通過黃-嘌-呤及黃-嘌-呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由
基(O2- ·),后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽,在顯色劑的作用下呈
現(xiàn)紫紅色,用可見光分光光度計(jì)測(cè)其吸光度。當(dāng)被測(cè)樣品中含
SOD 時(shí),則對(duì)超氧陰離子自由基有專一性的抑制作用,使形成
的亞硝酸鹽減少,比色時(shí)測(cè)定管的吸光度值低于對(duì)照管的吸光
度值,通過公式計(jì)算可求出被測(cè)樣品中的 SOD 活力。
高等動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)只有二種 SOD 即銅鋅-SOD(CuZn-SOD)
與錳-SOD(Mn-SOD),二者相加等于總 SOD(T-SOD),經(jīng)樣本前
處理過的樣本中 Mn-SOD 活力喪失,但 CuZn-SOD 活力不變。
【有效期和保存條件】
本試劑盒保存期:6 個(gè)月;貯存溫度:4℃,注意 4 號(hào)貯備
液須放在-20℃以下,溫度偏高酶容易失效,所用塑料吸嘴尖要
干凈,最好消毒,或者用雙蒸水將新吸嘴尖頭反復(fù)沖洗,一定
要避免菌類及重金屬離子污染。
【實(shí)驗(yàn)中所需的儀器和自備的試劑】
550nm 的分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀、37℃恒溫水浴或氣浴箱、
臺(tái)式離心機(jī)、移液器、雙蒸水、冰醋酸(分析純,乙酸濃度
≥99.5%)。
【試劑組成與配制】
1、(50 管/24 樣,貨號(hào) A001-2-1)試劑的組成與配制:(如您
只需做 CuZn-SOD 則可做到 48 樣)
試劑一:貯備液:5mL×1 瓶(天冷時(shí)或放冰箱會(huì)有部分結(jié)晶
析出,需 37℃加熱溶解后再用);試劑一應(yīng)用液的
配制:用時(shí)每瓶 5mL 貯備液加雙蒸水稀釋至 50mL,
4℃可保存 1 年。
試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃~10℃可保存 1 年。
試劑三:液體 5mL×1 瓶,4℃~10℃可保存 1 年。
試劑四:貯備液:350μL×1 支,-20℃以下保存(如需多次使用,
請(qǐng)?jiān)诘谝淮谓鈨龊蠓盅b保存);稀釋液:5mL×1 瓶,
4℃可保存 6 個(gè)月。試劑四應(yīng)用液的配制:用時(shí)按貯
備液:稀釋液=1∶14 比例配制,用多少配多少,現(xiàn)用
現(xiàn)配。
試劑五:粉劑×1 支,用時(shí)加入雙蒸水 37.5mL(可在液面位置
標(biāo)記一下)加熱至 70℃~80℃溶解后備用,若加熱過
程中水分蒸發(fā)減少,此時(shí)必須用雙蒸水補(bǔ)充至標(biāo)記
處,配好后的試劑避光 4℃可冷藏 1 年。
試劑六:粉劑×1 支,用時(shí)加入雙蒸水 37.5mL 溶解后備用,配好
后試劑避光 4℃冷藏可保存 6 個(gè)月。
顯色劑的配制:按試劑五:試劑六:冰醋酸=3:3:2 的體積比配顯
色劑,用多少配多少,配好的顯色劑 4℃可避光冷藏
3 個(gè)月。
試劑七:20mL×1 瓶;4℃冷藏可保存 6 個(gè)月。
2、(100 管/48 樣,貨號(hào) A001-2-2)試劑的組成與配制:(如
您只需做 CuZn-SOD 則可做到 96 樣)
試劑一:貯備液, 10mL×1 瓶(天冷時(shí)或放冰箱會(huì)有部分結(jié)
晶析出,需 37℃加熱溶解后再用);試劑一應(yīng)用液的
配制:用時(shí)每瓶 10mL 貯備液加雙蒸水稀釋至
100mL,4℃可保存 1 年。
試劑二:液體 10mL×1 瓶,4℃~10℃可保存 1 年。
試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃~10℃可保存 1 年。
試劑四:貯備液 350μL×2 支,-20℃以下保存(如需多次使用,
請(qǐng)?jiān)诘谝淮谓鈨龊蠓盅b保存);稀釋液 10mL×1 瓶,
4℃可保存 6 個(gè)月。試劑四應(yīng)用液的配制:用時(shí)按貯備
液:稀釋液=1∶14 比例配制,用多少配多少,現(xiàn)用現(xiàn)
配。
試劑五:粉劑×1 支,用時(shí)加入雙蒸水 75mL(可在液面位置標(biāo)
記一下)加熱至 70℃~80℃溶解后備用,若加熱過程
中水分蒸發(fā)減少,此時(shí)必須用雙蒸水補(bǔ)充至標(biāo)記處,
配好后的試劑避光 4℃可冷藏 1 年。
試劑六:粉劑×1 支,用時(shí)加雙蒸水 75mL 溶解后備用,配好后試
劑避光 4℃冷藏可保存 6 個(gè)月。
顯色劑的配制:按試劑五:試劑六:冰醋酸=3:3:2 的體積比配顯
色劑,用多少配多少,配好的顯色劑 4℃避光可冷藏
3 個(gè)月。
試劑七:30mL×1 瓶;4℃冷藏可保存 6 個(gè)月。
【樣本前處理】
1、取樣本 0.2mL 加試劑七 0.2mL,旋渦混勻器充分混勻 1 分
鐘后,以 3500~4000 轉(zhuǎn)/分,離心 15 分鐘(臺(tái)式離心機(jī)),
取上清進(jìn)行 CuZn-SOD 測(cè)定。此上清液即經(jīng)過處理后的樣
本,Mn-SOD 活力喪失而 CuZn-SOD 活力不受影響。
2、同時(shí)取生理鹽水 0.2mL 加試劑七 0.2mL,旋渦混勻器充分
混勻 1 分鐘后,以 3500~4000 轉(zhuǎn)/分,離心 15 分鐘(臺(tái)式
離心機(jī)),取上清作 CuZn-SOD 對(duì)照。
注:如樣本量不夠可按比例減少樣本和試劑用量。
超氧化物歧化酶(SOD)分型測(cè)定試劑盒2