超微量 -Na +K+ Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測試盒

(測組織、培養(yǎng)細(xì)胞)

一、試劑組成與配制：

二、樣本的前處理：

1、組織的前處理：（組織勻漿上清液的制備參考實(shí)驗(yàn)方法學(xué)）

準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）：體積(mL)=1:9 的比例，加

入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，2500 轉(zhuǎn)/

分，離心 10 分鐘，取上清液（即 10%的勻漿上清液），再用

生理鹽水 10 倍稀釋成 1%，同時用考馬斯亮藍(lán)試劑測定組織

蛋白（試劑本所有售）。如果預(yù)試結(jié)果太高，再將 1%的組織

勻漿稀釋成不同濃度再進(jìn)行預(yù)試后再決定取樣濃度。

2、培養(yǎng)細(xì)胞的前處理：將培養(yǎng)細(xì)胞消化，離心，棄上清，留下

層細(xì)胞，每管加 0.2～0.3mL 生理鹽水或勻漿介質(zhì)制備成

10 7 /cm3 細(xì)胞懸液，即 10 7 /mL，再進(jìn)行破碎。破碎細(xì)胞的方

法有三種：①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉碎器粉碎。③、

反復(fù)凍溶 3 次（第③種方法有時會影響酶活力）。制備好的

細(xì)胞懸液不需要離心，同時用考馬斯亮蘭試劑測定組織蛋白

（試劑本所有售）。再將細(xì)胞勻漿液稀釋成不同濃度進(jìn)行預(yù)

試，根據(jù)預(yù)試結(jié)果決定取樣濃度。

[注 1]：在測試加樣前要搖勻后取樣。

[注 2]：不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻漿或

稀釋樣本。

[注 3]：預(yù)試結(jié)果將絕對吸光度值（測定管吸光度值—對照

管吸光度值）控制在 0.2 左右為宜。

三、規(guī)范操作步驟：

1、酶促反應(yīng)：

六、測定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機(jī)磷，測定無機(jī)磷的

量可判斷 ATP 酶活力的高低。

七、測定意義：

ATP 酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上，是生物膜上的

一種蛋白酶，它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳遞方面具

有重要的作用，機(jī)體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下，此酶活力發(fā)

生一系列改變，另外有些遺傳疾病也與此酶活力有關(guān)。

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