蘋果酸脫氫酶（MDH）測(cè)定試劑盒

（測(cè)血清、血漿 紫外法）

二、操作步驟：

a、將紫外分光光度計(jì)于 340nm 處,0.5cm 光徑石英比色皿,以雙蒸水調(diào)零 (石英比色皿準(zhǔn)備兩只,一只用于調(diào)零,一只用于測(cè)定)。

b、將工作液，37℃預(yù)溫 3 分鐘以上。

c、往相應(yīng)編號(hào)的試管中加入 100μl 待測(cè)樣本，取 1ml 工作液迅速?zèng)_入試管中，立即混勻并計(jì)時(shí)。(空白管取 100μl 雙蒸水,加入 1ml 工作液,其它操作與測(cè)定相同)

d、迅速倒入石英比色皿中在紫外分光光度計(jì) 340nm 處比色，20 秒時(shí)讀取吸光度值（A1值）,在 1 分 20 秒時(shí)再次測(cè)定吸光度值（A2值）；

e、求出 2 次吸光度差值（△A=A1-A2）。

[注]：空白管只須做 1～2 只 (空白 OD 很穩(wěn)定)

若△A 測(cè)定/分＜0.05 則需加大樣本的濃度；否則影響檢測(cè)結(jié)果。

若△A 測(cè)定/分＞0.3，則需將樣本的濃度稀釋后再測(cè)；否則影響檢測(cè)結(jié)果。

請(qǐng)?jiān)谂繖z測(cè)前一定要取正常對(duì)照組樣本做此樣本濃度的預(yù)試

四、測(cè)定原理：

蘋果酸脫氫酶（Malate Dehydrogenase, MDH）催化的氧化還原反應(yīng)伴隨著 340nm 處吸光度的降低，通過測(cè)定每分鐘吸光度的變化來計(jì)算蘋果酸脫氫酶的活力。

五、測(cè)定意義：

MDH 與植物代謝的多條重要途徑有密切關(guān)系，它在運(yùn)轉(zhuǎn)物質(zhì)和能量的 Mal/OAA（蘋果酸/草酰乙酸）和 Mal/Asp（蘋果酸/天冬氨酸）穿梭中起重要作用；在光呼吸中，MDH 為 Gly（甘-氨酸）氧化提供 NAD +；在線粒體中，MDH還是決定 TCA(三羧酸循環(huán))運(yùn)轉(zhuǎn)速度的調(diào)節(jié)酶之一；在細(xì)胞溶質(zhì)中，MDH 與丙酮酸支路相聯(lián)系。所以 MDH 系統(tǒng)不僅是研究酶區(qū)域化和酶調(diào)節(jié)的好系統(tǒng)，也為研究各細(xì)胞器之間的聯(lián)系和許多發(fā)育問題提供了方便。

根據(jù)近幾年文獻(xiàn)報(bào)道，該酶不僅與植物病理有關(guān)，還與抗凍，抗鹽有關(guān)。MDH 與抗熱的關(guān)系僅見于對(duì)嗜熱菌的報(bào)道。

蘋果酸脫氫酶可用于繼發(fā)性肝癌早期診斷與鑒別和心肌病早期診斷繼發(fā)性肝癌時(shí) MDH1、MDH2、MDH3活性均增強(qiáng)。

AMI 時(shí) 12～24 小時(shí)，MDH3酶帶活性增強(qiáng)。也表明心肌細(xì)胞線粒體損傷

①、MDH 總活性升高和 MDH3增強(qiáng)：病毒性肝炎初期和病情極變期。幅度與病情的嚴(yán)重性相關(guān)，發(fā)病初期測(cè)定 MDH3意義更大。

②、MDH1和 MDH2增強(qiáng)：急性肝炎、肝細(xì)胞壞死。

③、MDH1、MDH2、MDH3活性均增強(qiáng)：肝臟腫瘤。有的腫瘤病人出現(xiàn) MDH4酶帶。

④、MDH3增強(qiáng)：急性心肌梗塞的陽性率為 91%，峰值出現(xiàn)時(shí)間約在 12～24 小時(shí)，是反應(yīng)心肌梗塞嚴(yán)重性的有效指標(biāo)。

附錄Ⅰ:小鼠血清酶反應(yīng)曲線

1、樣本來源：取小鼠新鮮全血，肝素抗凝，然后置于低速離心機(jī)中，以 1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘，然后分離血漿，待測(cè)。

2、操作表：

a、將紫外分光光度計(jì)于 340nm 處,0.5cm 光徑石英比色皿,以雙蒸水調(diào)零 (石英比色皿準(zhǔn)備兩只,一只用于調(diào)零,一只用于測(cè)定)。

b、將工作液，37℃預(yù)溫 3 分鐘以上。

c、往相應(yīng)編號(hào)的試管中加入 100μl 待測(cè)樣本，取 1ml 工作液迅速?zèng)_入試管中，立即混勻并計(jì)時(shí)。(空白管取 100μl 雙蒸水,加入 1ml 工作液,其它操作與測(cè)定相同)

d、迅速倒入石英比色皿中在紫外分光光度計(jì) 340nm 處比色，20 秒時(shí)讀取吸光度值（A1值）,在 1 分 20 秒時(shí)再次測(cè)定吸光度值（A2值）；

e、求出 2 次吸光度差值（△A=A1-A2）。

 蘋果酸脫氫酶（MDH）測(cè)定試劑盒