微量丙二醛(MDA)測(cè)試盒 檢測(cè)服務(wù)
- 型 號(hào):
- 參考價(jià):0~0
微量丙二醛(MDA)測(cè)試盒,是在原MDA 試劑盒針對(duì)一些含量較少的樣本(比如培養(yǎng)細(xì)胞及細(xì)胞上清)測(cè)試效果不是太好的的基礎(chǔ)上改進(jìn)的一種更為靈敏、簡(jiǎn)便的測(cè)試方法。
微量丙二醛(MDA)測(cè)試盒
(比色法)
本試劑盒是在原MDA 試劑盒針對(duì)一些含量較少的樣本
(比如培養(yǎng)細(xì)胞及細(xì)胞上清)測(cè)試效果不是太好的的基礎(chǔ)上
改進(jìn)的一種更為靈敏、簡(jiǎn)便的測(cè)試方法。
一、測(cè)試原理:
過(guò)氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛 (MDA)可與硫代巴
比妥酸(TBA)縮合,形成紅色產(chǎn)物,在 532nm 處有吸
收峰。因底物為硫代巴-比妥酸(Thibabituric Acid TBA)所
以此法稱 TBA 法。
二、測(cè)試所需儀器和試劑:
可見(jiàn)光分光光度計(jì),可調(diào)到 95℃左右的恒溫水浴箱或
沸水浴鍋,離心機(jī),無(wú)水乙醇(分析純),冰醋酸(分析純)。
三、試劑盒組成與配制(50 管/24 樣 A003-2-1):
試劑一:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 6mL×1 瓶,用時(shí)加 170mL 雙蒸水混勻,4℃
冷藏。(注意不要碰到皮膚上)。
試劑三:粉劑×1 支,用時(shí)將粉劑加到 32mL 雙蒸水中,加
熱到 90℃~100℃,充分溶解后再加冰醋酸 30mL,
混勻后冷卻至室溫,配好的試劑避光室溫保存。
(注:冰醋酸自備)
標(biāo)準(zhǔn)品:10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶,4℃冷藏。
四、試劑盒組成與配制(100 管/48 樣 A003-2-2):
試劑一:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 12mL×1 瓶,用時(shí)每瓶加 340mL 雙蒸水混
勻,4℃冷藏(注意不要碰到皮膚上)。
試劑三:粉劑×1 支,用時(shí)將粉劑加到 62mL 雙蒸水中,加
熱到 90℃~100℃,充分溶解后再加冰醋酸
60mL,混勻后冷卻至室溫,配好的試劑避光室溫
保存。(注:冰醋酸自備)
標(biāo)準(zhǔn)品:10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶,4℃冷藏。
水浴(或用鍋開(kāi)蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻, 532nm
處,1cm 光徑,雙蒸水調(diào)零,測(cè)各管吸光度值 A。
a* 表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無(wú)水乙醇的量、試劑一的量,
四者均相等。例如樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無(wú)水乙醇、試劑
一也取 0.1mL,若樣品取 0.2mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無(wú)水乙醇及試劑
一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正比曲線,因而結(jié)果不
受影響。
** 對(duì)照管每個(gè)樣本都需要做。
2、參考取樣量:血清(漿)取 0.1~0.2mL。低密度脂蛋白懸
液取 0.1~0.2mL 。細(xì)胞懸液及細(xì)胞上清取
0.1~0.2mL。
3、規(guī)范操作方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL
時(shí),則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度為
0.065~0.070(1cm 光徑)。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為
0.2mL 時(shí),則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光
度為 0.130~0.140(1cm 光徑)。
4、規(guī)范操作方法及簡(jiǎn)便操作方法中,若發(fā)現(xiàn)檢測(cè)樣本吸光度
太低,可以將水浴時(shí)間 40 分鐘延長(zhǎng)至 80 分鐘,但您的同
一課題中 MDA 的檢測(cè)都必須延長(zhǎng)至 80 分鐘,以免造成批
間差異。
六、簡(jiǎn)便操作方法:(如果樣本數(shù)量很多,您可以采用簡(jiǎn)便操作
方法。)
1、混合試劑的配制:
工作液Ⅰ的配制:試劑一:試劑二:試劑三= a*:3:1,用多少配
多少,配好后當(dāng)天測(cè)定;
工作液Ⅱ的配制:試劑一:試劑二: 50%冰醋酸= a*:3:1,用多
少配多少,配好后當(dāng)天測(cè)定。
注:a*表示與樣本的取樣量相同,單位為毫升(mL)
旋渦混勻器混勻,試管口用保鮮薄膜扎緊,用針頭刺一小
孔,95℃水浴(或用鍋開(kāi)蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻,
532nm 處,1cm 光徑,雙蒸水調(diào)零,測(cè)各管吸光度值。
a* 表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無(wú)水乙醇的量、試劑一
的量,四者均相等。例如樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無(wú)水
乙醇、試劑一也取 0.1mL,若樣品取 0.2mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、
無(wú)水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正
比曲線,因而結(jié)果不受影響。
** 對(duì)照管每個(gè)樣本都需要做。
注 1:以上規(guī)范操作法及簡(jiǎn)便操作法適用于人及各種動(dòng)植物
的樣本(包括血清、動(dòng)植物組織及體液、細(xì)胞及細(xì)胞
培養(yǎng)液等)。
注 2:規(guī)范操作方法及簡(jiǎn)便操作方法中,若發(fā)現(xiàn)檢測(cè)樣本吸
光度太低,可以將水浴時(shí)間 40 分鐘延長(zhǎng)至 80 分鐘,
但您的同一課題中 MDA 的檢測(cè)都必須延長(zhǎng)至 80 分
鐘,以免造成批間差異。
七、測(cè)定意義:
機(jī)體通過(guò)酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基,后者能攻擊
生物膜中的多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,
PUFA),引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用,并因此形成脂質(zhì)過(guò)氧化物。
如:醛基(丙二醛 MDA)、酮基、羥基、羰基、氫過(guò)氧基或
內(nèi)過(guò)氧基,以及新的氧自由基等。脂質(zhì)過(guò)氧化作用不僅把活
性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑,即非自由基性的脂類(lèi)分解產(chǎn)物,而
且通過(guò)鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng),放大活性氧的作用。因此,初
始的一個(gè)活性氧能導(dǎo)致很多脂類(lèi)分解產(chǎn)物的形成,這些分解
產(chǎn)物中,一些是無(wú)害的,另一些則能引起細(xì)胞代謝及功能障
礙,甚至死亡。氧自由基不但通過(guò)生物膜中多不飽和脂肪酸
(PUFA)的過(guò)氧化引起細(xì)胞損傷,而且還能通過(guò)脂氫過(guò)氧
化物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。因而測(cè)試 MDA 的量常???/span>
反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度,間接地反映出細(xì)胞損傷的程
度。
MDA 的測(cè)定常常與 SOD 的測(cè)定相互配合,SOD 活力的
高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力,而 MDA 的高低
又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度,通過(guò) SOD
與 MDA 的結(jié)果分析有助于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥理及工農(nóng)業(yè)生
產(chǎn)的發(fā)展。
八、注意點(diǎn):
1、試管要干凈,尤其測(cè)微量樣品時(shí)更為重要。
2、配制試劑時(shí)要充分混勻。測(cè)試過(guò)程中第一管吸的試劑要
丟棄,加樣品或試劑時(shí)要垂直加,不要加在管壁上。95℃
水浴前要充分混勻。
3、水浴時(shí)間及溫度要固定。沒(méi)有水浴鍋的單位可用鋁鍋、
鋁盒、鋁盆等開(kāi)蓋煮沸即可。
4、高脂樣本操作時(shí),離心沉淀一定要充分,否則影響吸光
度,造成結(jié)果不穩(wěn)定。這種情況可增加離心轉(zhuǎn)速(3000
轉(zhuǎn)/分以上)或者延長(zhǎng)離心時(shí)間使沉淀。
5、冬天若發(fā)現(xiàn)測(cè)試溶液呈霧狀可以輕輕放水浴箱稍稍加
溫,待溶液溶解呈透明狀態(tài)用移液器吸取放入比色杯
中,若仍然呈霧狀,則考慮為高脂血癥。
6、樣本取樣量:若您的樣量較多,取樣量可以加倍,抽提
過(guò)程中,雙蒸水、無(wú)水乙醇、氯仿均要加倍。若您的樣
本為貧血病人的血樣,則取樣量也要加倍,抽提過(guò)程中,
雙蒸水、無(wú)水乙醇、氯仿的量則不變。
7、95℃水浴時(shí)最好用帶蓋的試管,以免反應(yīng)液的蒸發(fā)。若
沒(méi)有帶蓋的試管可用冰箱保鮮膜蓋好,用橡皮筋扎好后
在保鮮膜上用針刺一小孔即可代替蓋子。
九、本試劑盒優(yōu)點(diǎn):
1、本試劑盒中試劑均無(wú)刺激性氣味,對(duì)操作人員無(wú)任何毒
害。
2、快速準(zhǔn)確,操作簡(jiǎn)便,每小時(shí)可測(cè) 100 例以上樣本。
3、靈敏度高,血清或血漿樣品只需 0.1mL,或者更少。
4、再現(xiàn)性好,變異系數(shù) CV=2.0%,同一份標(biāo)本數(shù)次測(cè)試結(jié)
果相差極微。
5、呈色穩(wěn)定,呈色后半天內(nèi)測(cè)吸光度不變。
6、試劑穩(wěn)定,保質(zhì)期一年;試劑三配制后避光室溫保存至
少 3 個(gè)月(顏色變成咖啡色即不可使用)。
7、血清樣品放置 4℃,3~5 天內(nèi)測(cè)試結(jié)果不變。-70℃以下
可保存 3 個(gè)月至半年。
8、測(cè)試面廣,可測(cè)血清(漿)、各種組織勻漿,培養(yǎng)細(xì)胞等。
9、主要原料均為進(jìn)口,但價(jià)格適中。
10、不需昂貴與特殊儀器,只需恒溫水浴箱或者鋁鍋、鋁盆
開(kāi)蓋煮沸,及 721、722、751、752 分光光度計(jì)任一型
號(hào)均可。
11、不受氣溫等外界因素的影響。是目前國(guó)內(nèi)MDA
測(cè)試方法。
微量丙二醛(MDA)測(cè)試盒