檸檬酸(Citric Acid,CA)試劑盒 生化試劑
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檸檬酸(Citric Acid,CA)試劑盒,是生物體內(nèi)常見的有機酸,是重要的食品風(fēng)味物質(zhì)。此外,CA 是三羧酸循環(huán)第一步反應(yīng)的產(chǎn)物。
檸檬酸(Citric Acid,CA)試劑盒
(50T/48 樣)
一、測定意義
檸檬酸(CA)是生物體內(nèi)常見的有機酸,是重要的
食品風(fēng)味物質(zhì)。此外,CA 是三羧酸循環(huán)第一步反應(yīng)的產(chǎn)
物。
二、測定原理
酸性條件下,檸檬酸還原 Cr 6+生成 Cr 3+ ,Cr 3+在 545nm
處有特征吸收峰;通過測定 545nm 吸光值的增加,即可
計算出樣品中檸檬酸含量。
三、自備實驗用品及儀器。
水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL 玻璃
比色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
四、試劑組成和配制
試劑一:液體×1 瓶,4°C 保存;
試劑二:液體×1 瓶,4°C 保存;
試劑三:液體×1 支,-20°C 保存;
試劑四:粉劑×1 瓶,室溫保存;臨用前加入 5mL 試劑一,
充分溶解配置;
試劑五:液體×1 瓶,4°C 避光保存;
標準品:液體×1 支,250μmol/L 檸檬酸標準液,4°C 保存。
五、樣品中檸檬酸提取
1、液體樣品中檸檬酸提?。喝?/span> 0.1mL 液體加試劑一 0.9mL,
充分混勻,11000g,4°C 離心 10min,取上清液待測;
2、組織中檸檬酸提取:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積
(mL)為 1:5 至 10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,
加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿,11000g;4°C 離心
10min,取上清液置冰上待測;
3、線粒體中檸檬酸提取:按照組織質(zhì)量(g):提取液體
積(mL)為 1:5 至 10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,
加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿;
600g,
4°C 離心 5min;
取上清至另一 EP 管中,11000g,4°C 離心 10min,棄
上清;向沉淀中加 200μL 試劑二,與 2μL 試劑三,充
分懸浮溶解,11000g;4°C 離心 10min,取上清液待測。
4、細菌、真菌中:按照細胞數(shù)量(10 4 個):試劑一體積
(mL)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入試
劑一 1mL),冰水浴超聲破碎細胞(功率 300W,超聲
3 秒,間隔 7 秒,總時間 3 分鐘),11000g;4°C 離心
10min,取上清液待測。
八、注意事項
1、樣品處理等過程均需在冰上進行;
2、試劑四需現(xiàn)配現(xiàn)用;
3. 試劑五中含有致癌物質(zhì),實驗過程中,請佩戴手套,
避免試劑五濺到皮膚上;
4. 檸檬酸提取液不能用于蛋白含量測定,如需測定蛋白
含量,需另取組織,使用本研究所蛋白質(zhì)含量檢測試
劑盒(考馬或 BCA 法)。
檸檬酸(Citric Acid,CA)試劑盒