超微量總 ATP 酶測試盒(測組織) 生化試劑
- 型 號:
- 參考價(jià):0~0
超微量總 ATP 酶測試盒(測組織),ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機(jī)磷,測定無機(jī)磷的量可判斷 ATP 酶活力的高低。
超微量總 ATP 酶測試盒(測組織)
(測組織\普通細(xì)胞)
一、測定意義:
ATP 酶存在與組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上,是生物膜
上的一種蛋白酶,它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳
遞方面具有重要的作用,機(jī)體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下,
此酶活力發(fā)生一系列改變,另外有些遺傳疾病也與此酶
活力有關(guān)。
二、測定原理:
ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機(jī)磷,測定無機(jī)
磷的量可判斷 ATP 酶活力的高低。
三、試劑組成與配制:
四、樣本前處理:
1、組織的前處理:(組織勻漿上清液的制備參考實(shí)驗(yàn)方法
學(xué))準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9
的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機(jī)械
勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清液(即 10%
的勻漿上清液),再用生理鹽水 10 倍稀釋成 1%,同時(shí)
用考馬斯亮藍(lán)試劑測定組織蛋白(試劑本所有售)。如
果預(yù)試結(jié)果太高,再將 1%的組織勻漿稀釋成不同濃度
再進(jìn)行預(yù)試后再決定取樣濃度。
2、培養(yǎng)細(xì)胞的前處理:將培養(yǎng)細(xì)胞消化,離心,棄上清,
留下層細(xì)胞,每管加 0.2~0.3ml 生理鹽水或勻漿介質(zhì)
制備成 10 7/cm 3細(xì)胞懸液,即 10 7/ml,再進(jìn)行破碎。破
碎細(xì)胞的方法有三種:①、用勻漿器勻漿。②、用超聲
粉碎器粉碎。③、反復(fù)凍溶 3 次(第③種方法有時(shí)會影
響酶活力)。制備好的細(xì)胞懸液不需要離心,同時(shí)用考
馬斯亮蘭試劑測定組織蛋白(試劑本所有售)。再將細(xì)
胞勻漿液稀釋成不同濃度進(jìn)行預(yù)試,根據(jù)預(yù)試結(jié)果決定
取樣濃度。
[注 1] 在測試加樣前要搖勻后取樣
[注 2]:不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻
漿或稀釋樣本。
[注 3]:預(yù)試結(jié)果將絕對吸光度值(測定管吸光度值—
對照管吸光度值)控制在 0.2 左右為宜。
超微量總 ATP 酶測試盒(測組織)