超微量 Ca 2+–ATP 酶測試盒 生化試劑
- 型 號:
- 參考價:0~0
超微量 Ca 2+–ATP 酶測試盒,制備好的細胞懸液不需要離心,同時用考馬斯亮藍試劑測定組織蛋白(試劑本所有售)。
超微量 Ca 2+–ATP 酶測試盒
(測組織、培養(yǎng)細胞)
一、試劑組成與配制:(試劑盒有效期 6 個月)
二、樣本的前處理:
1、組織的前處理:(組織勻漿上清液制備參考實驗方法學)
準確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9
的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機
械勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清液(即 10%
的勻漿上清液),再用生理鹽水 10 倍稀釋成 1%,同時
用考馬斯亮藍試劑測定組織蛋白(試劑本所有售)。如
果預試結(jié)果太高,再將 1%的組織勻漿稀釋成不同濃度
再進行預試后再決定取樣濃度。
2、培養(yǎng)細胞的前處理:將培養(yǎng)細胞消化,離心,棄上清,
留下層細胞,每管加 0.2~0.3mL 生理鹽水或勻漿介質(zhì)
制備成 10 7 /cm3細胞懸液,即 10 7 /mL,再進行破碎。破
碎細胞方法有三種:①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉
碎器粉碎。③、反復凍溶 3 次(第③種方法有時會影響
酶活力)。制備好的細胞懸液不需要離心,同時用考馬
斯亮藍試劑測定組織蛋白(試劑本所有售)。再將細胞
勻漿液稀釋成不同濃度進行預試,根據(jù)預試結(jié)果決定取
樣濃度。
[注 1]:在測試加樣前要搖勻后取樣。
[注 2]:不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻
漿或稀釋樣本。
[注 3]:預試結(jié)果將絕對吸光度值(測定管吸光度值—
對照管吸光度值)控制在 0.2 左右為宜。
五、測定意義:
ATP 酶存在于組織細胞及細胞器的膜上,是生物膜
上的一種蛋白酶,它在物質(zhì)運送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳
遞方面具有重要的作用,機體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下,
此酶活力發(fā)生一系列改變,另外有些遺傳疾病也與此酶
活力有關(guān)。
六、測定原理:
ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機磷,測定無機
磷的量可判斷 ATP 酶活力的高低。
超微量 Ca 2+–ATP 酶測試盒