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內(nèi)毒素清除劑(EndotoxinRemovalReagent)

內(nèi)毒素(endotoxin)的化學本質(zhì)為脂多糖(lipopolysaccharides)，是革蘭氏陰性菌細胞壁的主要組成成分。脂多糖共價連接到非極性的疏水性類脂A(lipid A)形成帶負電荷的大分子，同時還具有一個親水性的寡糖核，因而具有疏水和親水雙重性質(zhì)。制備質(zhì)粒DNA和重組蛋白時，細菌破壁之后將釋放大量脂多糖。無論是普通制備純化程序，還是離子交換、凝膠排阻過濾、甚至是氯化銫超速離心等高級制備程序，脂多糖將不可避免地與DNA或蛋白質(zhì)牢固結(jié)合而被共同純化。脂多糖具有強烈的免疫活性和細胞毒性，并能產(chǎn)生多種復雜的細胞生物學效應，大多數(shù)情況下會明顯干擾并產(chǎn)生不可預測的實驗結(jié)果。例如在DNA轉(zhuǎn)染實驗中，內(nèi)毒素競爭性干擾轉(zhuǎn)染試劑與DNA的結(jié)合，顯著降低轉(zhuǎn)染效率，并產(chǎn)生明顯細胞毒性, 降低外源基因表達水平。在體轉(zhuǎn)染時, 與DNA結(jié)合的內(nèi)毒素無疑是主要的致熱原。DNA、蛋白質(zhì)或其它樣品中內(nèi)毒素污染，無論是對原代和傳代細胞還是整體動物均具有顯著的毒性作用。

內(nèi)毒素清除劑能與DNA、重組蛋白以及液體樣品中的內(nèi)毒素特異結(jié)合。在特定pH、鹽濃度、溫度條件下，經(jīng)過室溫12000 rpm離心，DNA或蛋白質(zhì)等保留在水相，內(nèi)毒素被濃縮到極小體積的下層相而被清除，從而達到清除內(nèi)毒素效果。經(jīng)過3次重復抽提可將活性為5,000~50,000 EU/ml的內(nèi)毒素水平降低到5~0.5 EU/ml以下，即降低1,000~10,000倍。

內(nèi)毒素清除劑(EndotoxinRemovalReagent)