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高脂樣本甘油三酯(TG)酶法測定試劑盒

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高脂樣本甘油三酯(TG)酶法測定試劑盒
甘油三酯是由甘油和脂肪酸酯化而成,是血脂的主要成分,也是機(jī)體重要的供能物質(zhì)。高甘油三酯和高膽固醇血癥是常見的高脂血癥,與許多疾病相關(guān)。與血漿甘油三酯測定相比,實(shí)體組織和細(xì)胞的甘油三酯測定并非易事。本試劑盒避免了有毒的氯反甲醇提取、繁雜的氮?dú)獯蹈珊椭|(zhì)復(fù)溶等步驟,采用高效能試劑進(jìn)行組織細(xì)胞裂解和甘油三酯抽提,而且優(yōu)化了GPO Trinder酶學(xué)反應(yīng)組分和操

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高脂樣本甘油三酯(TG)酶法測定試劑盒

原理:(1)脂肪酶分解血清中的甘油三酯為甘油;(2)甘油激酶將甘油磷酸化為3-磷酸甘油;(3)3-磷酸甘油被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化氫;在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺,其光密度值與甘油濃度成正比。

適用范圍:適用于動物實(shí)體組織、培養(yǎng)細(xì)胞樣品中甘油三酯含量的測定。

操作步驟:

 組織細(xì)胞裂解:(在裂解前,組織或者細(xì)胞用PBS洗滌兩次以去除甘油)

1.原代脂肪細(xì)胞:2000g,5分鐘離心收集細(xì)胞。建議每100 µl壓積(Packed Cell Volume)脂肪細(xì)胞加入1ml裂解液,震蕩裂解,而后室溫靜

置10分鐘。

2.分化脂肪細(xì)胞或非脂肪細(xì)胞:可先用胰酶消化、離心收集細(xì)胞而后進(jìn)行裂解,也可直接在培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行裂解。通常情況下,(6孔板單孔約為2x10個細(xì)胞,75cm2瓶約為1x10個細(xì)胞)可按比例每1x10個細(xì)胞加入0.1ml裂解液,混勻后室溫靜置10分鐘。

3.動物組織:離心管精確稱重,加入組織塊后再稱重,二者相減(即減量稱重法)計算組織重量(約50mg)。強(qiáng)烈建議按比例每1mg組織加20µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質(zhì)含量變異而產(chǎn)生的誤差。強(qiáng)烈建議裂解液用量在1ml左右,保證有效的勻漿裂解與脂質(zhì)提取。用電動高速勻漿器或手動玻璃勻漿器破碎組織。(不超聲方法,因其不能*和均勻破碎。應(yīng)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整初始的組織細(xì)胞加入量),勻漿后靜置10分鐘。

 

 

高脂樣本甘油三酯(TG)酶法測定試劑盒

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