升級(jí)版線粒體提取試劑盒(組織和細(xì)胞通用)
- 型 號(hào):
- 參考價(jià):1.00~1.00
升級(jí)版線粒體提取試劑盒(組織和細(xì)胞通用)線粒體(mitochondrion)是一種存在于大多數(shù)細(xì)胞中的由兩層膜包被的細(xì)胞器,是細(xì)胞中制造能量的結(jié)構(gòu),是細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸的主要場(chǎng)所,被稱為“power house“
所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等
升級(jí)版線粒體提取試劑盒(組織和細(xì)胞通用)
線粒體(mitochondria)是真核細(xì)胞中產(chǎn)生能量的重要細(xì)胞器。細(xì)胞中的能源物質(zhì)—脂肪、糖、部分氨基酸在此進(jìn)行氧化,并通過(guò)偶聯(lián)磷酸化生成ATP,供給細(xì)胞生理活動(dòng)之需。對(duì)線粒體結(jié)構(gòu)與功能的研究通常是在離體的線粒體上進(jìn)行的,本試劑盒用簡(jiǎn)便快速的方法即可在40 分鐘內(nèi)提取得到線粒體。
操作步驟:
1. 樣本處理 a. 組織勻漿:稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨組織20次; b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿:消化細(xì)胞,PBS洗滌,800g離心5~10 min收集細(xì)胞,計(jì)數(shù)。每次提取需要5×107個(gè)細(xì)胞,加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi),0℃冰浴研磨30~40次。
2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管,4℃,1000g 離心5 min。
3. 取上清,轉(zhuǎn)移至新的離心管中,4℃,1000g再次離心5 min。
4. 取上清,轉(zhuǎn)移至新的離心管中,4℃, 12,000 g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分,可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管,線粒體沉淀在管底。
5. 往線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀,4℃,1000 g 離心5 min。
6. 取上清,轉(zhuǎn)移至新的離心管中,4℃, 12,000 g 離心10 min。棄上清,高純度的線粒體沉淀在管底。
7. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀,立即使用或-70℃保存。
注意事項(xiàng):
1. 為保證獲得完整的線粒體,務(wù)必做到:一,全程低溫操作;第二,快速;第三,在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞,這是制備線粒體的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比,培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁,因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度,不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳,可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。 轉(zhuǎn)速與離心力換算: G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2 G為離心力,一般以g(重力加速度)的倍數(shù)來(lái)表示; [rpm]2即:轉(zhuǎn)速的平方; R為半徑,單位為厘米。
升級(jí)版線粒體提取試劑盒(組織和細(xì)胞通用)