線粒體和胞漿蛋白制備試劑盒
- 型 號:
- 參考價:1.00~1.00
線粒體和胞漿蛋白制備試劑盒線粒體/胞漿制備試劑盒 (Mitochondria Isolation Kit)用于從組織或培養(yǎng)細胞中分離線粒體和細胞胞漿成分。加入分離溶液,勻漿破碎組織細胞,經(jīng)過數(shù)次800g和12000g離心,在60分鐘內(nèi)即可分離出完整的線粒體和胞漿成分。制備的線粒體具有很高的生物學(xué)活性,可進行各種功能研究如酶學(xué)測定,更可用于Western Blot、2D-膠、線粒體蛋白或DNA提取
所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等
線粒體和胞漿蛋白制備試劑盒
線粒體參與能量代謝過程,參與細胞凋亡與老化等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,參與退行性疾病如帕金森氏病,腫瘤等病理過程。線粒體/胞漿分離試劑盒 (Mitochondria Isolation Kit)用于從組織或培養(yǎng)細胞中分離線粒體和胞漿成分。加入緩沖液勻漿破碎組織或培養(yǎng)細胞,經(jīng)過數(shù)次800g和12000g離心,在60分鐘內(nèi)即可分離出完整的線粒體和胞漿成分。用于Western Blot、2D-膠、ELISA、酶學(xué)測定、線粒體蛋白或DNA提取、蛋白質(zhì)組學(xué)等研究。
制備程序:
1. a. 組織勻漿:稱取50-200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS沖洗,用剪刀剪為0.5cm2碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。估計組織塊總體積。加入1.5 ml冰預(yù)冷的Mito-Cyto Buffer。上下研磨組織20次。
b. 培養(yǎng)細胞勻漿:消化細胞,PBS洗滌,800 × g 5~10 min離心收集細胞。計數(shù)。每次提取需要5 × 107個細胞。加入1.5 ml冰預(yù)冷的Mito-Cyto Buffer重懸細胞,將細胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)。用間隙嚴密的研杵研磨細胞30-40次。
2. 將組織或細胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管。800 × g 離心5 min 4 ºC。細胞核、大的膜碎片、未裂解細胞等在管底。
3. 收集上清液并轉(zhuǎn)移到新的離心管。800 × g 離心5 min at 4 ºC。棄沉淀
4. 將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管。12,000 × g 離心10 min 4 ºC。離心后的上清含胞漿成分,將上清轉(zhuǎn)移到新離心管。線粒體沉淀在管底。
5. 洗滌線粒體:清除管內(nèi)壁粘連的液體和碎片,加入0.2 ml Mito-Cyto Buffer重懸線粒體沉淀,12,000 × g 離心10 min 4 ºC。棄上清。
6. 用Mito-Cyto Buffer或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀,50 µl/每100 mg組織,100 µl/5 × 107個細胞。測定蛋白濃度。立即使用或−70 ºC保存。
線粒體和胞漿蛋白制備試劑盒