細(xì)胞核-胞漿蛋白-胞膜制備試劑盒
- 型 號(hào):
- 參考價(jià):1.00~1.00
細(xì)胞核-胞漿蛋白-胞膜制備試劑盒本試劑盒能夠從哺乳動(dòng)物新鮮或凍存的組織塊、貼壁或懸浮細(xì)胞中制備細(xì)胞核、細(xì)胞膜與胞內(nèi)質(zhì)膜、細(xì)胞漿等三種主要亞細(xì)胞組分。其*的試劑成分與優(yōu)化的制備方案使細(xì)胞核-胞漿-胞膜制備過程簡單易行,無需特殊設(shè)備和超速離心,可在1小時(shí)內(nèi)完成。
所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等
細(xì)胞核-胞漿蛋白-胞膜制備試劑盒
本試劑盒能夠從哺乳動(dòng)物新鮮或凍存的組織塊、貼壁或懸浮細(xì)胞中制備細(xì)胞核、細(xì)胞膜與胞內(nèi)質(zhì)膜、細(xì)胞漿等三種主要亞細(xì)胞組分。其*的試劑成分與優(yōu)化的制備方案使細(xì)胞核-胞漿-胞膜制備過程簡單易行,無需特殊設(shè)備和超速離心,可在1小時(shí)內(nèi)完成。應(yīng)用本試劑盒制備的胞膜是細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及質(zhì)膜的混合物;得到的細(xì)胞核是完整的未裂解細(xì)胞核,胞漿組分為可溶性胞漿蛋白。制備得到的產(chǎn)物純度可勝任后續(xù)的免疫沉淀、蛋白印跡、2-D gel、酶活性檢測和受體分析等實(shí)驗(yàn)。
操作步驟:
1、 樣本預(yù)處理
2、 組織細(xì)胞勻漿裂解
3、 粗提物制備
4、 胞膜胞漿制備
5、 細(xì)胞核制備:
說明:
1. Suspension Buffer 不含去垢劑,重懸于Suspension Buffer 中的胞膜或胞核組分呈不溶解狀態(tài)是正常的,用戶可用自備溶液重懸胞膜或胞核成分。如果進(jìn)行蛋白印跡、2-D get等實(shí)驗(yàn),用戶可用SDS上樣緩沖直接裂解細(xì)胞膜或細(xì)胞核成分。對于進(jìn)行免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)來說,可用RIPA裂解液(C1053)重懸胞膜或胞核組分。
2. 胞漿組分可直接進(jìn)行蛋白定量。胞核組分如需定量可加入TritonX-100至終濃度1%或SDS至終濃度0.5%用BCA法蛋白定量。
3. 用SDS-PAGE Loading 緩沖液裂解細(xì)胞核后,DNA釋放會(huì)使核裂解物十分粘稠,可95oC加熱5分鐘,高速震蕩打斷DNA,重復(fù)加熱2-3次。
4. 如果進(jìn)行凝膠阻滯(EMSA)實(shí)驗(yàn),建議使用普利萊P1200產(chǎn)品,該試劑盒可直接提取可溶性核蛋白.
5. 試劑盒各組分中未添加蛋白酶抑制劑,用戶可自行選擇添加,通常4oC快速操作不加蛋白酶抑制劑不會(huì)出現(xiàn)問題。
6. 沉淀胞漿蛋白方法:估算胞漿蛋白組分的體積,加入1/3體積30%三氯醋酸水溶液,-20 oC沉淀1小時(shí)或過夜。5,000g, 4 oC離心10分鐘,棄上清,空氣略干沉淀。用1xSDS上樣緩沖液溶解沉淀,95oC加熱5分鐘,上樣電泳。
細(xì)胞核-胞漿蛋白-胞膜制備試劑盒