樹脂包埋(透射電鏡)實(shí)驗(yàn)代測
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樹脂包埋(透射電鏡)實(shí)驗(yàn)代測樹脂包埋是將客戶處理后固定在電鏡固定液中的標(biāo)本,進(jìn)行修整、鋨酸后固定、脫水等過程后,采用進(jìn)口812環(huán)氧樹脂作為包埋劑,將組織標(biāo)本包埋在樹脂中。經(jīng)過此種樹脂包埋的樣本適合進(jìn)行超薄切片,透射電鏡觀察。
所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等
樹脂包埋(透射電鏡)實(shí)驗(yàn)代測
樹脂包埋是將客戶處理后固定在電鏡固定液中的標(biāo)本,進(jìn)行修整、鋨酸后固定、脫水等過程后,采用進(jìn)口812環(huán)氧樹脂作為包埋劑,將組織標(biāo)本包埋在樹脂中。經(jīng)過此種樹脂包埋的樣本適合進(jìn)行超薄切片,透射電鏡觀察。
服務(wù)說明
樹脂包埋實(shí)驗(yàn)步驟:
1、取材:電鏡取材非常嚴(yán)格,取材過程中速度要快,5分鐘內(nèi)要將組織取出放入固定液中;取材組織塊要小,一般要求將組織切成1立方毫米大?。蝗〔牟课灰獪?zhǔn)確、取材溫度要低是在4℃條件下進(jìn)行;取材工具要干凈,鋒利。如果是貼壁細(xì)胞不可用酶消化下來,先吸去培養(yǎng)液然后加入電鏡固定液用橡膠塊刮下細(xì)胞,離心,細(xì)胞體積保證綠豆大小即可,然后吸去上清更換固定液繼續(xù)固定。
2、固定:取材后要及時(shí)固定,組織、細(xì)胞、蛋白等固定選用2.5%中性戊二醛固定液,植物等標(biāo)本則需要選用多聚甲醛和戊二醛的混合固定液。室溫固定兩小時(shí)左右后,放入4℃保存運(yùn)輸(如果是植物或者肺組織,則需要進(jìn)行真空抽氣固定,一般需要抽氣固定24小時(shí)左右,直至標(biāo)本*沉入容器底部)。
3、鋨酸后固定:將標(biāo)本從固定液中取出,用0.1mol/L的PB清洗并過夜,第二天轉(zhuǎn)入1%鋨酸后固定,固定時(shí)間普通標(biāo)本2h左右,植物標(biāo)本8至12h左右。
3、脫水:鋨酸固定后的標(biāo)本用用0.1mol/L的PB清洗后使用梯度乙醇脫水,濃度依次是50%、70%、80%、90%、95%、100%,植物標(biāo)本則會在50%乙醇前面再增加一個(gè)30%乙醇梯度,脫水時(shí)間普通標(biāo)本為10~15min,植物標(biāo)本脫水時(shí)間為1~1.5h
4、浸透:用丙酮作為乙醇和樹脂間的過度溶劑,從純丙酮開始,中間經(jīng)過丙酮和樹脂的混合劑,混合比例丙酮從高到低到純樹脂,整個(gè)浸透過程需要1~2天完成。
5、包埋:先將組織對應(yīng)的標(biāo)簽放包埋板中,然后加入樹脂,再將浸透好的樣本放入包埋板中,調(diào)整好包埋面,然后放入恒溫箱內(nèi)熟化,熟化過程需要2~3天。熟化完成后,樣本樹脂包埋完成。
樹脂包埋(透射電鏡)實(shí)驗(yàn)代測
注意事項(xiàng)
1、透射電鏡對取材要求嚴(yán)格,取材過程中速度要快,5分鐘內(nèi)要將組織取出放入固定液中;取材組織塊要小,一般要求將組織切成1立方毫米大?。蝗〔牟课灰獪?zhǔn)確、取材溫度要低,是在4℃條件下進(jìn)行;取材工具要干凈,鋒利。如果是貼壁細(xì)胞不可用酶消化下來,先吸去培養(yǎng)液然后加入電鏡固定液用橡膠塊刮下細(xì)胞,離心,細(xì)胞體積保證綠豆大小即可,然后吸去上清更換固定液繼續(xù)固定。
2、2.5%戊二醛固定液要選擇在保質(zhì)期內(nèi)(固定液變黃不可用),固定液的量要足夠,至少是組織的10倍以上,如果組織固定過程中固定液明顯變黃也需要更換一次固定液;植物組織要選擇戊二醛和多聚甲醛的混合固定液;植物和肺組織由于標(biāo)本本身含有大量氣體,會導(dǎo)致固定液無法進(jìn)入標(biāo)本內(nèi)部達(dá)不到充分固定,所以需要真空抽氣固定。
3、樹脂包埋的樣本可以常溫保存,但是由于樹脂會吸潮變軟,所以在切片前需要提前放入60℃恒溫箱中烘烤12小時(shí)及以上,樣本烘烤時(shí)不能被密封,需要單獨(dú)放入紙盒或者金屬盒中。
4、樣本在取材、固定、運(yùn)輸?shù)冗^程中不可冰凍、結(jié)冰,結(jié)冰會對樣本的超微結(jié)構(gòu)造成冰晶損傷。