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MTT實(shí)驗(yàn)代測

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MTT實(shí)驗(yàn)代測

MTT全稱為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,漢語化學(xué)名為 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。MTT法,又稱MTT比色法,是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。

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MTT實(shí)驗(yàn)代測

MTT全稱為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,漢語化學(xué)名為 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。MTT法,又稱MTT比色法,是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

MTT實(shí)驗(yàn)代測

服務(wù)說明

MTT細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟

1、細(xì)胞種板:將對數(shù)生細(xì)胞用胰蛋白酶消化,配制成濃度為1-10×104/ml的細(xì)胞懸液,按10000細(xì)胞/孔接種于96孔板,每孔加100μl,置于CO25%)培養(yǎng)箱中37℃下培養(yǎng)24h以貼壁。

2、加藥處理:繼續(xù)培養(yǎng)0h、12h、24h36h分別更換為100μl細(xì)胞樣品各自對應(yīng)的含有一定濃度藥物的培養(yǎng)基,對照組更換為含溶劑的培養(yǎng)基,分別記為藥物處理48h36h、24h、12h。每個樣本濃度設(shè)三個重復(fù)。

3、MTT反應(yīng):所有孔中加入20μl 濃度為5mg/ml的、新鮮配制的MTT溶液,培養(yǎng)箱中孵育4小時(shí),使MTT還原為甲瓚(此時(shí)倒置顯微鏡下可看到孔板內(nèi)的細(xì)胞周圍出現(xiàn)絲狀紫色結(jié)晶體)。

4、DMSO溶解甲瓚:小心的吸除上清液,每孔加DMSO(二甲基亞砜)150μl,用搖床搖勻。

5、測吸光度值:使用酶標(biāo)儀測定570nm光吸收值,以溶劑處理細(xì)胞為對照組,按公式計(jì)算藥物對細(xì)胞的抑制率。

抑制率=1-(實(shí)驗(yàn)組-空孔)/(對照組-空孔)

 

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