蛋白提取實(shí)驗(yàn)代測(cè)
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- 參考價(jià):0~0
服務(wù)簡(jiǎn)介A、對(duì)于懸浮細(xì)胞: 離心收集細(xì)胞,每106細(xì)胞加250 ul RIPA(在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑),振蕩。如果需要提高蛋白濃度,可以適當(dāng)減少細(xì)胞總蛋白提取試劑體積。B、對(duì)于貼壁細(xì)胞:a、用TBS沖洗細(xì)胞2-3次。Z后一次*吸干殘留液。b、加入適當(dāng)體積的 RIPA(使用前數(shù)分內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)于培養(yǎng)板、瓶?jī)?nèi)3-5分鐘。期間反復(fù)晃動(dòng)培養(yǎng)板、瓶,使試劑與細(xì)胞充分接觸。
所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等
蛋白提取實(shí)驗(yàn)代測(cè)
服務(wù)說明
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、細(xì)胞總蛋白提取
A、對(duì)于懸浮細(xì)胞: 離心收集細(xì)胞,每106細(xì)胞加250 ul RIPA(在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑),振蕩。如果需要提高蛋白濃度,可以適當(dāng)減少細(xì)胞總蛋白提取試劑體積。
B、對(duì)于貼壁細(xì)胞:
a、用TBS沖洗細(xì)胞2-3次。zui后一次*吸干殘留液。
b、加入適當(dāng)體積的 RIPA(使用前數(shù)分內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)于培養(yǎng)板、瓶?jī)?nèi)3-5分鐘。期間反復(fù)晃動(dòng)培養(yǎng)板、瓶,使試劑與細(xì)胞充分接觸。
c、用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞及試劑刮下,收集到1.5ml離心管中。
C、冰浴30min,期間用移液器反復(fù)吹打,確保細(xì)胞*裂解。
D、12000g離心5min,收集上清,即為總蛋白溶液。
2、組織蛋白提取:
A、組織塊用冷TBS洗滌2-3次,去除血污,剪成小塊置于勻漿器。加入10倍組織體積本試劑(使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)冰上*勻漿。如果需要提高蛋白濃度,可以適量減少該試劑體積。
B、將勻漿液轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中,振蕩。冰浴30min,期間用移液器反復(fù)吹打,確保細(xì)胞*裂解。
C、12000g離心5min,收集上清,即為總蛋白溶液。
蛋白提取實(shí)驗(yàn)代測(cè)
注意事項(xiàng)
1、組織盡可能新鮮,若不能及時(shí)提蛋白,組織標(biāo)本應(yīng)保存在-80℃冰箱,并避免反復(fù)凍融。
2、全程必須在冰上進(jìn)行,避免蛋白降解。
3、蛋白酶抑制劑在水溶液中不穩(wěn)定,需在RIPA使用前數(shù)分鐘加入蛋白酶抑制劑。
4、裂解過程中如有溶液粘稠現(xiàn)象可用移液器(200μl)反復(fù)吹打,或再加入適量裂解液以保證充分裂解。
5、總蛋白溶液不穩(wěn)定(蛋白酶依舊有活性)可在-80℃短時(shí)間保存,建議立即加入蛋白上樣緩沖液變性后與-20℃保存,避免反復(fù)凍融。