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TRAP染色實(shí)驗(yàn)代測(cè) 檢測(cè)服務(wù)

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TRAP染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)
實(shí)驗(yàn)樣本類(lèi)型:石蠟/冰凍切片
主要用途:觀察骨組織內(nèi)破骨細(xì)胞的數(shù)量及分布情況
信帆生物提供各類(lèi)實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù),更多服務(wù)項(xiàng)目歡迎致電咨詢(xún),我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)!

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TRAP染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)

TRAP染色簡(jiǎn)介:

TRAP是酸性磷酸梅(ACP)同功酶6種同工酶(0-5)中的第5型,OC含量zui為豐富,通常作為鑒別OC的重要標(biāo)志。染色目的主要作用于EDTA脫鈣的骨組織內(nèi)破骨細(xì)胞(紅色,背景藍(lán)色),TRAP染色結(jié)果顯示OC胞漿陽(yáng)性,呈酒紅色,核呈陰性。


骨組織切片及trap染色實(shí)驗(yàn)步驟(僅供參考):

1、骨組織脫鈣:新鮮骨組織固定于4%多聚甲醛24h以上。將組織從固定液取出置于EDTA脫鈣液內(nèi)脫鈣(不能用含酸的脫鈣液脫鈣),每3天換一次脫鈣液,至骨組織針扎可以順利通過(guò)為止。

2、取材:在通風(fēng)櫥內(nèi)用手術(shù)刀將目的部位組織修平整,將修切好的組織和對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽放于脫水盒內(nèi)。

3、脫水:將脫水盒放進(jìn)吊籃里于脫水機(jī)內(nèi)依次梯度酒精進(jìn)行脫水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-無(wú)水乙醇I 30min-無(wú)水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蠟I 1h-蠟II 1h-蠟III 1h。

4、包埋:將浸好蠟的組織于包埋機(jī)內(nèi)進(jìn)行包埋。先將融化的蠟放入包埋框,待蠟?zāi)讨皩⒔M織從脫水盒內(nèi)取出按照包埋面的要求放入包埋框并貼上對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽。于-20°凍臺(tái)冷卻,蠟?zāi)毯髮⑾瀴K從包埋框中取出并修整蠟塊。

5、切片:將修整好的蠟塊置于石蠟切片機(jī)上切片,片厚4μm。 切片漂浮于攤片機(jī)40℃ 溫水上將組織展平,用載玻片將組織撈起,并放進(jìn)60℃ 烘箱內(nèi)烤片。待水烤干蠟烤化后取出常溫保存?zhèn)溆谩?

6、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無(wú)水乙醇Ⅰ10min-無(wú)水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸餾水洗。

7、染液配制:A液:0.1mol/L醋酸緩沖液PH5.0:醋酸鈉1.3608g+蒸餾水100ml溶解,用冰醋酸調(diào)PH值到5.0。B液:六偶氮副品紅 4%亞硝酸鈉:2g亞硝酸鈉+去離子水50ml

副品紅溶液:副品紅2.5g+去離子水50ml+濃鹽酸7.5ml,加熱至90°溶解后過(guò)濾,4°棕色瓶保存。臨用前4%亞硝酸鈉與副品紅溶液等比例混合。

TRAP染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)

C液:萘酚AS-BI磷酸酯20mg+N,N-二甲基甲酰胺1ml溶解。

孵育液配制:A液18ml+B液1ml+C液1ml混勻,用1M NaOH或1M鹽酸調(diào)pH至5.0,再加酒石酸鉀鈉0.282g,充分溶解過(guò)濾后備用即為T(mén)RAP孵育液。

8、染色:切片置于TRAP孵育液內(nèi)37°孵育50min,鏡下觀察破骨細(xì)胞呈酒紅色為止。蒸餾水漂洗。

9、蘇木素染細(xì)胞核:切片入Harris蘇木素染3-8min,自來(lái)水洗,1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來(lái)水沖洗,0.6%氨水返藍(lán),流水沖洗。

10、脫水封片:將切片依次放入95%酒精I(xiàn) 5min -95%酒精I(xiàn)I 5min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min -無(wú)水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脫水透明,將切片從二甲苯拿出來(lái)稍晾干,中性樹(shù)膠封片。

11、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。

染色結(jié)果:EDTA脫鈣的骨組織內(nèi)破骨細(xì)胞(紅色,背景藍(lán)色)


TRAP染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)

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