Mg 2+ -EGTA-ATP 酶測(cè)試盒

（貨號(hào)：A070-7 測(cè)魚(yú)肉樣本）

二、測(cè)定原理：

肌動(dòng)球蛋白及肌動(dòng)蛋白的ATPase很容易受到Ca 2+、Mg 2+、

EGTA、對(duì)氯汞基苯（PCMB）、離子強(qiáng)度及 pH 值的影響。因

此，選擇嚴(yán)格的條件來(lái)測(cè)定 ATPase 活性，可以反映出蛋白質(zhì)

特定的性質(zhì)。組成魚(yú)類(lèi)肌肉蛋白質(zhì)的肌動(dòng)球蛋白和肌動(dòng)蛋白

在切斷 ATP 末端的磷酸基后生成 ADP 和無(wú)機(jī)磷酸。利用這一

點(diǎn)，將生成的無(wú)機(jī)磷酸比色定量后可以表示 ATPase 活性。

三、樣本的前處理：

魚(yú)肉肌原纖維蛋白的提取:準(zhǔn)確稱(chēng)取魚(yú)肉樣本，自然解凍，

剪碎。稱(chēng)取碎肉 1g，加入 15mL 預(yù)冷的生理鹽水作為勻漿介

質(zhì)進(jìn)行勻漿，然后用 9500rpm 冷凍離心 30min，取上清液，

加入 3 倍預(yù)冷的雙蒸水，搖勻，再次用 9500rpm 冷凍離心

30min，棄上清液，留沉淀。用預(yù)冷的生理鹽水溶解，用力搖

勻，最后用 9500rpm 冷凍離心 20min，取上清液，即為肌原

纖維蛋白液。

四、規(guī)范操作步驟：

1、酶促反應(yīng)：

六、測(cè)定意義：

ATP 酶 活 性 可 以 分 為 Ca 2+ -ATPase 活 性 、

Mg 2+ -ATPase 活 性 、 Ca 2+ -Mg 2+ -ATPase 活 性 和

Mg 2+ -EGTA-ATPase 活性。Ca 2+ -ATPase 活性是評(píng)價(jià)肌球

蛋白完整性的良好指標(biāo)，Mg 2+ -ATPaSe 活性是在有內(nèi)源

性 Ca 2+情況下評(píng)價(jià)肌動(dòng)球蛋白復(fù)合體的完整性的指標(biāo)，

Ca 2+ -Mg 2+ -ATPaSe 活性是在無(wú)內(nèi)源性 Ca 2+情況下評(píng)價(jià)肌

動(dòng)球蛋白復(fù)合體的完整性的指標(biāo)，而Mg 2+ -EGTA-ATPase

活性則表明了原肌球蛋白-肌鈣蛋白復(fù)合體的完整性。因

此肌原纖維蛋白的 ATPase 活性常常作為評(píng)價(jià)肌動(dòng)球蛋

白完整性的指標(biāo)，用于評(píng)價(jià)魚(yú)肉或魚(yú)糜蛋白的變性程度。

Mg 2+ -EGTA-ATP 酶測(cè)試盒