過氧化氫酶（CAT）測定試劑盒

（鉬酸銨法）

一、測定原理：

過氧化氫酶（Catalase）分解 H2O2 的反應(yīng)可通過加入

鉬酸銨而迅速中止，剩余的 H2O2與鉬酸銨作用產(chǎn)生一種淡

黃色的絡(luò)合物，在 405nm 處測定其變化量，可計算出 CAT

的活力。

二、試劑組成與配制：(100 管/96 樣)

試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存 6 個月。

試劑二：底物液體 10mL×1 瓶，4℃保存 6 個月。

試劑三：顯色粉劑×1 瓶，4℃保存 6 個月。加雙蒸水 100mL

溶解，4℃保存 1 個月。（如果底部有不溶粉末沉

淀，直接取上清使用，不影響測定結(jié)果）

試劑四：液體 10mL×1 瓶，4℃保存 6 個月。天冷時會凝固，

臨用前 37℃加熱至透明方可使用。

（二）、組織樣本的檢測：

1、組織勻漿液的制備：準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）:體

積（mL）=1:9 的比例加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件

下，制備成 10%的組織勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘，取上

清，再用生理鹽水稀釋成取樣濃度，待測（取樣濃

度摸索見附錄）。

注：一般情況下樣本沒有高脂（渾濁、不透明）、顏色

等導(dǎo)致顯著差異情況，對照管的樣本可隨機(jī)取樣，做 1～

2 管對照即可。如需做樣本自身對照，則試劑盒所測定

樣本數(shù)量減至 48 樣。

3、組織中 CAT 活力的計算：

（1）、定義：每毫克組織蛋白每秒鐘分解 1µmol 的 H2O2

為一個活力單位。

注：271 為斜率的倒數(shù)，常數(shù)，直接使用;V 樣：取樣量，

0.05mL；T：反應(yīng)時間，60 秒；Cpr：勻漿液蛋白濃

度，mgprot/mL（prot 指蛋白）。

（三）、全血的檢測：

1、1﹕99 溶血液的制備：取 50µL 全血加雙蒸水至 5mL 充

分混勻后放置 10 分鐘，待測。

注：全血樣本測定時必須每個樣本都要做自身對照管，空白

對照管只需做 1 管。

3、血紅蛋白中 CAT 活力的計算：

（1）、定義：每毫克血紅蛋白每秒鐘分解 1µmol 的 H2O2

為一個活力單位。

四、注意事項：

1、本試劑盒也可用酶標(biāo)儀讀數(shù)（即在反應(yīng)完后取 200μL 反

應(yīng)液加入孔板（注意避免氣泡產(chǎn)生），405nm 處讀數(shù)，

計算公式斜率倒數(shù)變?yōu)?/span> 235.65 代入計算）；

2、植物樣本在測定時，一般不需要稀釋來摸索濃度（因

為植物中 CAT 活力較低），可直接取樣測定（或加大樣本

量測定），計算時也可不測蛋白濃度，改用質(zhì)量濃度（植

物質(zhì)量（g）/提取液總體積（mL））代替蛋白濃度代入計

算即可；

3、測定時，加入試劑二的同時需要計時，反應(yīng)到 60 秒時

必須加入試劑三以終止反應(yīng)；

4、細(xì)胞樣本做法也可參照組織樣本，前處理可參考本公

司“技術(shù)支持"中“技術(shù)文章"。

附錄Ⅰ:取樣濃度摸索

一、樣本來源：正常小鼠肝組織

二、前處理：

10%勻漿液的制備：準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）

:

體積（mL）=1:9 的比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰

水浴條件下機(jī)械勻漿，制成 10%的組織勻漿，2500 轉(zhuǎn)/

分，離心 10 分鐘，取上清液待測；10%的勻漿液再用生

理鹽水稀釋成不同的濃度： 5%、2%、1%、0.5%、0.25%、

0.125%

 過氧化氫酶（CAT）測定試劑盒