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過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒(動(dòng)物組織)

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過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒(動(dòng)物組織),是化學(xué)性質(zhì)最活潑的活性氧,它幾乎與細(xì)胞內(nèi)的每一類有機(jī)物如糖、氨基酸、磷脂、核苷酸和有機(jī)酸等都能反應(yīng),并且有非常高的速度常數(shù),因此它具有破壞性,但它可以被過氧化氫酶分解,因而測定過氧化氫酶的高低就有其重要意義。

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過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒(動(dòng)物組織)

(紫外法)

一、測定意義:

氫氧自由基(OH·)是化學(xué)性質(zhì)最活潑的活性氧,它

幾乎與細(xì)胞內(nèi)的每一類有機(jī)物如糖、氨基酸、磷脂、核苷

酸和有機(jī)酸等都能反應(yīng),并且有非常高的速度常數(shù),因此

它具有破壞性,但它可以被過氧化氫酶分解,因而測定

過氧化氫酶的高低就有其重要意義。

二、測定原理:

紅細(xì)胞或組織中過氧化氫酶(Catalase)在一定條件下

能直接分解其底物過氧化氫(H2O2),使 H2O2 在反應(yīng)液

中的濃度逐漸降低,相應(yīng)的吸光度也逐漸下降。

三、試劑組成與配制(100 /96 樣):

試劑一:30mL 水劑貯備液×1 瓶,4℃可保存 6 個(gè)月。

試劑二:甲粉×1 瓶,乙粉×1 瓶,4℃可保存 6 個(gè)月。用時(shí)

各加雙蒸水 200mL,溶解后混合一起,再用

雙蒸水定容至 500mL,配成試劑二應(yīng)用液,4℃保

3 個(gè)月。

五﹑操作步驟:

1﹑樣本前處理:

①﹑溶血液的制備:

取老鼠的新鮮血液 50μL 加雙蒸水至 2.5mL

混勻配成 1:49 溶血液。

②﹑1%肝組織勻漿的制備:

按《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》制備 10%肝組織勻漿,再

取部分 10%肝組織勻漿,用生理鹽水按

1

9 稀釋制備成 1%肝組織勻漿。

注:如果樣本(腦組織、神經(jīng)組織等)的 CAT 活力太低,

可以加大樣本濃度或增加取樣量。

2﹑測定過程:

1cm 光徑石英比色皿,紫外 240nm,雙蒸水調(diào)零

備用。取經(jīng)過前處理的樣本 0.02mL 加入比色皿底部,

將已預(yù)溫至25℃,OD0.50.55 之間的底物溶液3mL

直接用 5mL 10mL 的大移液器快速?zèng)_入比色皿中,

240nm 處立即測定吸光度,記下 A1值,比色皿不要取

出,1 分鐘時(shí)立即再測一次吸光度,記下 A2 值。(沒

有大移液器可用滴管或細(xì)玻棒快速混勻 12 次)

七、注意點(diǎn):

1、為了減少誤差,兩只石英比色杯要進(jìn)行校正。

2、每次加樣前比色杯要用雙蒸水沖洗 23 次,扣干備用。

3、每次比色前(加樣前)比色杯的透光面要用擦鏡紙擦干

凈。

4、比色與計(jì)時(shí)要同步,最好為二個(gè)人或者用自動(dòng)生化分析

儀。

5、加樣品量不可太大,以免產(chǎn)生氣泡影響吸光度。

6、1:100 的溶血液放置室溫下不可超過 2 小時(shí)。

7、腦組織和神經(jīng)組織中過氧化氫酶活力非常低。

 過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒(動(dòng)物組織)

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