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過氧化物酶(POD)測試盒(測植物) 生化試劑

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過氧化物酶(POD)測試盒(測植物),催化過氧化氫反應(yīng)的原理,通過測定420nm 處吸光度的變化得出其酶活性。

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過氧化物酶(POD)測試盒(測植物)

(測植物)

一、測定原理:

利用過氧化物酶(POD)催化過氧化氫反應(yīng)的原理,通過測定

420nm 處吸光度的變化得出其酶活性。

二、試劑的組成和配制(100 /48 樣):

試劑一:60mL 液體×4 ,4℃可保存 6 個月。

試劑二:粉劑×3 ,4℃可保存 6 個月。

試劑二應(yīng)用液的配制:臨用每瓶粉劑加入 10mL 的雙蒸水溶

解, 4℃避光保存。(顏色變深以后棄用)

試劑三:5mL 液體×1 瓶, 4℃可保存 6 個月。

試劑三應(yīng)用液的配制:臨用前用蒸餾水 1530 倍稀釋,使

得在 1cm 光徑、波長 240nm 下,蒸餾水調(diào)零時,

試劑三應(yīng)用液的吸光值保持在 0.4 左右,現(xiàn)用現(xiàn)配。

若吸光值太高,則加蒸餾水稀釋,若吸光值太低,

加入適量試劑三。(一般在 25 倍左右稀釋)

試劑四:50mL 液體×2 瓶, 4℃可保存 6 個月。

三、操作步驟:

1、前處理:

植物組織勻漿的制備:準(zhǔn)確稱取植物組織重量,按照重

量(g

:體積(mL)=1:9 的比例加入 9 倍體積的勻漿介質(zhì)(推

薦使用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液0.1mol /L pH77.4),

冰水浴條件下制備成 10%的組織勻漿液,3500 轉(zhuǎn)/分離心

10 分鐘后,取上清液進(jìn)行測定。

五、注意事項:

1、樣本測試前請選取2 例預(yù)期差異的樣本,稀釋成不同濃度

(推薦 5 倍、10 倍、20 倍稀釋)進(jìn)行預(yù)試,選取樣本濃

度(測定 OD—對照 OD 0.20.4 內(nèi)對應(yīng)的樣本濃度為

濃度);

2、本試劑盒測定時也可在反應(yīng)完后吸取 200μL 反應(yīng)液進(jìn)入 96

孔板中,酶標(biāo)儀 420nm±10nm)處讀取吸光值,此時光

徑約為 0.576cm(此值為大概值,并無準(zhǔn)確依據(jù))代入計算;

3、試劑三在調(diào)濃度時,是在分光光度計 240nm(紫外波長)

下,1cm 光徑石英比色皿中讀數(shù)達(dá)到 0.4 左右,如非使用

石英材質(zhì)比色皿,可能無法檢測。

 過氧化物酶(POD)測試盒(測植物)

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