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α-凝-血酶(凍干粉)使用原理

更新時間:2024-04-17   點(diǎn)擊次數(shù):137次
 α-凝-血酶(α-Thrombin)是一種高度特異性的絲-氨酸蛋白酶,由凝-血酶原(Prothrombin,II因子)經(jīng)蛋白水解活化而來。它在凝血過程中起著非常重要的作用,不僅能夠促使纖維蛋白凝塊的產(chǎn)生,還負(fù)責(zé)提供反饋信號來激活前輔因子:V因子和VIII因子。也可以激活XIII因子和血小板,或者用作血管收縮劑。

在體內(nèi),活化的X因子(Factor Xa)切割凝-血酶原,釋放出活性肽并將凝-血酶切割成具有催化活性的α-凝-血酶。α-凝-血酶由一條輕鏈(A chain)(Mw~6,000)和一條重鏈(B chain)(Mw~31,000)通過二硫鍵連接而成。某些情況下,α-凝-血酶會發(fā)生自溶生成β-凝-血酶和γ-凝-血酶。β-凝-血酶由對α-凝-血酶A鏈水解并切割含有B鏈糖基化位點(diǎn)的小片段(B1,B2)組合而成。

除了用于凝血研究之外,α-凝-血酶還常用來位點(diǎn)特異性切割融合蛋白。基因重組時將凝-血酶識別位點(diǎn)插入在目的蛋白與利于后續(xù)純化和/或表達(dá)的多肽或者蛋白之間,通過凝-血酶切割表達(dá)的重組子即可釋放目的蛋白。凝-血酶本身可通過親和層析技術(shù)快速去除。

本品是由勻質(zhì)化的人凝-血酶原經(jīng)由Xa因子,Va因子和磷脂活化而得,經(jīng)SDS-PAGE檢測確保凝-血酶原的完-全活化,并以NIH凝-血酶的標(biāo)準(zhǔn)品為參考,提供的酶活力不少于3091 NIH U。
使用方法(酶切體系)
 
 
 
產(chǎn)品溶于水,配成的1000 U/ml儲存液,根據(jù)使用量分配于不同的離心管中,凍存于?20℃保存,凝血-酶對不同的融合蛋白切割效率是不一樣的,首先要進(jìn)行小量切割試驗(yàn)。比如固定融合蛋白10ug,加不同量的凝血-酶(如0.1U,?0.2U,?0.5U,?1U等),?在不同的溫度(如4度,?16度,?室溫或37度等)下進(jìn)行試驗(yàn)。
 
建議摸好最佳條件后再進(jìn)行擴(kuò)大酶切實(shí)驗(yàn)
 
 
 
注意事項(xiàng)
 
 
 
1) 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2) 本產(chǎn)品僅作科研用途!
 


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