常規(guī)病理染色實驗代測的樣本包埋與固定
更新時間:2023-12-29 點擊次數(shù):177次常規(guī)病理染色實驗代測的樣本包埋與固定
HE染色實驗
HE染色法,即是蘇木精-伊紅染色法。石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)分別稱為嗜堿性和嗜酸性;若于兩種染料的親和力都不強,則呈中性。一般的組織變化和組織產(chǎn)物都可以通過這一染色法顯示出來。是形態(tài)學(xué)的染色方法。
染色結(jié)果:細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍色,粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。
樣本包埋與固定
(1)固定:根據(jù)需要取材后置于福爾馬林中固定48小時后;
(2)洗滌與脫水:將固定后的組織用流水沖洗,去除殘留的固定液和雜質(zhì)。不同濃度的乙醇逐級脫水,50%、70%、85%、95%直至純酒精(無水乙醇),每級2小時。70%乙醇中可長期保存;
(3)透明:50%酒精+50%二甲苯中2小時,純二甲苯兩小時,再一次純二甲苯兩小時;
(4)浸蠟:先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1~2小時,再先后移入2個熔化的石蠟液中浸漬各3小時左右;
(5)包埋:將浸好蠟的組織塊放入裝有蠟液的容器中,擺好組織塊位置。待石蠟?zāi)毯髮⒅車嘤嗟氖炄コ瑴?zhǔn)備切片;
(6)切片:將切片刀裝在刀片機的刀架上并固定緊,固定蠟塊底座或蠟塊,調(diào)整蠟塊與刀至合適位置,刀刃與蠟塊表面呈5度角。調(diào)整切片機上的切片厚度為4-7μm,然后切片。
HE染色
(1) 脫蠟:60℃、30min;二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ;
(2)水化:將脫蠟后的切片經(jīng)100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、雙蒸水各3min ;
(3)將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘,流水沖洗;
(4)1%鹽酸酒精分化0.5-1min;
(5)流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻;
(6)碳-酸-鋰飽和水溶液反藍1min后流水沖洗;
(7)入70%和90%酒精中脫水各10min;
(8)入酒精伊紅染色液染色2-3min;。
(9)脫水透明:染色后的切片經(jīng)純酒精脫水,再經(jīng)二甲苯使切片透明;
(10)封片:將已透明的切片滴上中性樹膠,蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后,貼上標(biāo)箋,切片標(biāo)本就可使用;
圖像采集
通過掃描,采集圖片。
Masson染色代測
Masson染色是用于顯示組織中纖維的染色方法之一,用于膠原纖維染色而經(jīng)典的技術(shù)方法。一般是用兩種或三種陰離子染料混合,膠原纖維呈藍色,肌纖維,胞質(zhì),纖維素 角蛋白紅細胞呈紅色,細胞胞核呈藍褐色。用來顯示組織中纖維以及炎性因子的染色方法之一。
常規(guī)病理染色實驗代測的樣本包埋與固定