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5’-核酸酶(5-NT)檢測(cè)試劑盒(藍(lán)微板法)的操作步驟

更新時(shí)間:2023-12-18   點(diǎn)擊次數(shù):162次

5’-核酸酶(5-NT)檢測(cè)試劑盒(藍(lán)微板法)的操作步驟

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

5-核昔酸酶(5'-NT 或 NTP)廣泛分布于肝臟、膽道及其他各種組織中,該酶活性變化

常與 ALP 活性相平行。但在骨骼系統(tǒng)的疾病中,如腫瘤骨轉(zhuǎn)移、畸形性骨炎、甲亢、佝僂

病等,ALP 活力增高,但是 5-NT 活力正常,所以對(duì)于 ALP 活力提高的情況,測(cè)定 5-NT

活力有助于判斷 ALP 活力增高原因是肝膽系統(tǒng)疾病還是骨骼系統(tǒng)疾病。

Leagene 5-核首酸酶(5-NT)檢測(cè)試劑盒(藍(lán)微板法)的檢測(cè)原理為 5-核首酸酶能催

 5-磷酸腺昔(AMP)水解,生成腺昔和磷酸,后者與酸反應(yīng)生成藍(lán),可用比色法測(cè)

定無機(jī)磷的含量,計(jì)算 5-NT 活性,利用離子能選擇性的抑制 5-NT 的特性,在測(cè)定管

不加人抑制劑鎳離子,測(cè)出的活性為 ALP 和 5-NT 總活性,在對(duì)照管加入離子,可以測(cè)

 ALP 的活性,測(cè)定管的酶活性減去對(duì)照管的酶活性即獲得 5-NT 活性,通過酶標(biāo)儀檢測(cè)

680nm 處吸光度。5-核昔酸酶的檢測(cè)對(duì)于研究自由基代謝平衡,抗衰老和腫瘤發(fā)病機(jī)制具

有一定的價(jià)值。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途

自備材料:

1、蒸餾水、生理鹽水

2、離心管或 EP 

3、離心機(jī)、水浴鍋

4、96 孔板、酶標(biāo)儀

操作步驟(僅供參考) :

1、準(zhǔn)備樣品

① 血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備,可以直接用于該試劑盒的測(cè)定,尿液通常也可以直接用于測(cè)定,-20°C凍存,用于 5-NT 的檢測(cè)

② 細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行裂解,可以采用 RAPI裂解液,如果有必要

需進(jìn)行適當(dāng)勻漿,低速離心取上清,-20°C凍存,用于 5-NT 的檢測(cè)。

③ 高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的 5-NT,可以使用 AMP 酸性緩沖液稀釋

④ (選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度,以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的 5'-NT 含量

2、配制對(duì)照 NT Assay 工作液 :取適量的 NT Assay Buffer I、IIIII,I : II:III=13 :1:2的比例混合,即為對(duì)照 NT Assay 工作液,4保存?zhèn)溆谩?/span>

3、配制測(cè)定 NT Assay 工作液 :取適量的 NT Assay Buffer I、II,按I:II=15 :1的比例混合,即為測(cè)定 NT Assay 工作液,4保存?zhèn)溆谩?/span>

4、配制磷標(biāo)準(zhǔn)工作液:取適量的磷標(biāo)準(zhǔn)(6mmol/L),按磷標(biāo)準(zhǔn)6mmol/L): AMP 酸性緩沖液=1:99 的比例混合,即為磷標(biāo)準(zhǔn)工作液(0.06mmol/L)4保存1個(gè)月。

5配制定磷工作液:按定磷酸性液:定磷還原液:溶液=6:1:1 ,即為定磷工作液工作液,4保存。

6NT 測(cè)定:混勻,靜置 5min,蒸水調(diào)零,酶標(biāo)儀測(cè)定 680nm 處吸光度(分別記為 A

白、A標(biāo)準(zhǔn)、A對(duì)照、 測(cè)定)。

注意事項(xiàng)

1、 本試劑盒亦可用分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),但檢測(cè)的樣品數(shù)相應(yīng)減少,如果有條件盡量采

用分光光度計(jì)檢測(cè),使其結(jié)果更為準(zhǔn)確

2、待測(cè)樣品中不能含有 5-NT 抑制劑,同時(shí)需避免反復(fù)凍融

3、用血漿測(cè)定有可能引起渾濁。

4溶血有輕度影響,脂血癥不會(huì)引起酶活性改變,但可能影響吸光度。

5與金屬鰲合的抗凝劑會(huì)干擾金屬離子的激活作用,因此不宜采用金屬鰲合抗凝劑

6、離心管或試管必須清潔,否則污染顯色反應(yīng)

有效期:6個(gè)月有效;4運(yùn)輸,4保存

 5’-核酸酶(5-NT)檢測(cè)試劑盒(藍(lán)微板法)的操作步驟



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