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RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測的服務(wù)內(nèi)容

更新時間:2023-11-30   點(diǎn)擊次數(shù):175次

RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測的服務(wù)內(nèi)容

服務(wù)內(nèi)容:

1.制定個性化實(shí)驗(yàn)方案:根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康拇_定實(shí)驗(yàn)方案、選定合適的內(nèi)參;
2.檢測類別:mRNA、miRNA、lncRNA、DNA;
3.樣本抽提及質(zhì)檢:對客戶提供樣本進(jìn)行RNA抽提,并利用NanoDrop進(jìn)行樣本質(zhì)檢;
4.定量PCR預(yù)實(shí)驗(yàn):包括樣本反轉(zhuǎn)錄為CDNA、配置PCR反應(yīng)體系及進(jìn)行Real-TimePCR反應(yīng);
5.正式定量PCR實(shí)驗(yàn):根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn);
6.數(shù)據(jù)分析:采用2- △△CT法進(jìn)行分析,比較不同樣本間差異。

 


服務(wù)要求:
1.請?zhí)峁┙M織樣本,細(xì)胞樣本,血漿或血清樣本,totalRNA;
2.請?zhí)峁┮阎娜L基因序列或GeneBank號;
3.請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA來源、基因豐度等。

 

結(jié)果內(nèi)容:整理好的報告,樣本收到之日起5個工作日內(nèi)反饋質(zhì)檢結(jié)果。

結(jié)果展示:


溶解曲線:



擴(kuò)增曲線


數(shù)據(jù)統(tǒng)計


每個指標(biāo)有2張圖。一張是擴(kuò)增曲線,另一張是熔解曲線,用來證明PCR擴(kuò)增中無非特異性擴(kuò)增



送樣運(yùn)輸要求:


1. 樣品處理


a. 動物組織:常規(guī)組織,脂肪組織,結(jié)締組織,纖維化組織適當(dāng)增加。將組織剪切成合適大小后(建議組織塊長寬高均不大于0.5 cm),然后迅速浸泡于5~10倍體積的RNAsolidTM試劑中。(注意:已浸入RNAsolidTM試劑中的組織經(jīng)平衡一段時間后,可從溶液中取出,切成更小的組織塊,再重新放回RNAsolidTM試劑中;有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等,不適合用RNAsolidTM試劑進(jìn)行RNA保護(hù)。)


b.植物組織:新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉,嫩莖組織切成合適的大?。ńㄗh長寬高均不大于0.5 cm)后,然后迅速浸泡于5~10倍體積的RNAsolidTM試劑中。(注意:某些植物組織天生具有的屏障,如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolidTM試劑的滲透,對于此類組織,通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。)


c.細(xì)胞等樣本:收集不小于10^6個細(xì)胞的沉淀(用PBS清洗1-2次)。之后迅速加入5~10倍體積的RNAsolidTM試劑。


d.酵母、細(xì)菌等樣本:離心棄上清,收集小米粒大小的單菌體沉淀,然后迅速加入適量的RNAsolidTM試劑浸沒菌體沉淀。


e. RNA樣品: OD260/280為1.8-2.0,濃度≥100 ng/μL,體積≥20μL,干冰運(yùn)輸。


f.cDNA:cDNA原液≥20 μL,干冰運(yùn)輸。


 2. 樣品保存及運(yùn)輸


加入有RNAsolidTM試劑的樣本可在37℃保存1~2天,2天以后部分組織中的RNA會開始降解。室溫(25℃)穩(wěn)定保存1周,不會有明顯的RNA降解發(fā)生。大部分樣品置于RNAsolidTM試劑中,4℃條件下可穩(wěn)定保存1個月,不會有明顯的RNA降解發(fā)生。長期存放可先將保存在RNAsolidTM試劑中的樣本4℃浸透過夜,然后將RNAsolidTM試劑吸出棄去,再將樣本放入-20℃或-80℃長期穩(wěn)定保存3~5年。

 

RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測的服務(wù)內(nèi)容


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