兔抗綿羊紅細(xì)胞（溶血素）的使用介紹
更新時(shí)間：2023-10-27 點(diǎn)擊次數(shù)：255次兔抗綿羊紅細(xì)胞（溶血素）的使用介紹
利用綿羊細(xì)胞與相應(yīng)抗體（溶血素）結(jié)合成的復(fù)合物，可激活血清中的補(bǔ)體，導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解，當(dāng)紅細(xì)胞和溶血素量一定時(shí)，在規(guī)定反應(yīng)的時(shí)間內(nèi)，溶血程度與補(bǔ)體量及活性呈正相關(guān)。在接近50%溶血（CH50）時(shí)，二者之間近似直線關(guān)系，故以50%溶血作為最敏感的判斷終點(diǎn)。以引起50%溶血所需的最小補(bǔ)體量為一個(gè) CH50U，可計(jì)算出待測血清中總的補(bǔ)體溶血活性，以 CH50U /ml表示。
產(chǎn)品全稱:凍干兔抗綿羊紅細(xì)胞（凍干溶血素）
規(guī)格：0.5ml*10支
效價(jià)：1:4000
批號：20230511
保存：-20℃，避光保存，避免反復(fù)凍融
有效期：12個(gè)月
使用方法：臨用前，每瓶加去離子水或者雙蒸水0.5ml重建后立即使用（10小時(shí)內(nèi)），不得反復(fù)使用。
相關(guān)實(shí)驗(yàn)測定步驟：（僅供參考）
本試驗(yàn)主要反映補(bǔ)體經(jīng)典活化途徑的溶血功能，其結(jié)果與補(bǔ)體C1~C9各組成分的量及活性均有關(guān)。
1．試劑及配制
(1)緩-沖生理鹽水：
①貯存液：
Na2HPO4·12H20 2.85g
KH2PO4 0.27g （加蒸餾水至100毫升，4℃保存）
NaCl 17.00g
②應(yīng)用液（緩沖液）:5毫升貯存液加95毫升蒸餾水，再加10%硫-酸鎂0.1毫升。當(dāng)日配制。12小時(shí)內(nèi)使用。
(2)2%綿羊紅細(xì)胞：無菌采取綿羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以緩沖液
洗3次，并配成2%細(xì)胞懸液。必要時(shí)可用吸光光度法或細(xì)胞計(jì)數(shù)法使懸液細(xì)胞濃度標(biāo)準(zhǔn)化。
(3)溶血素：將本品（效價(jià)1:4000)，用緩沖液做1:2000倍稀釋（即1ml溶血素加1999毫升緩沖液）。
(4)待測血清：新鮮血液室溫放置30分鐘，再4℃放置60分鐘，收縮。4℃離心
(3000r/min )10分鐘，取上清，-20℃保存。
2．試管法操作步驟（改良 Mayer 法）
(1)致敏羊紅細(xì)胞：2%綿羊紅細(xì)胞加等量稀釋后的溶血素（1:2000)，混勻，置37℃水浴30分鐘。
(2)稀釋血清：待測血清0.2ml，加緩沖液3.8ml，稀釋度為1:20。
(3)配制溶血標(biāo)準(zhǔn)管：2%綿羊紅細(xì)胞2ml加8ml蒸餾水，混勻，即為全溶血管。取全溶血管液2ml加緩沖液2m1，即為50%溶血管。
(4)按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置37℃水浴30分鐘。第10管為非溶血對照。
補(bǔ)體 CH50 測定試管法
成分 | 試管號 | |||||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
1:20待測血清 | 0.10 | 0.15 | 0.20 | 0.25 | 0.30 | 0.35 | 0.40 | 0.45 | 0.50 | - |
緩沖液（ml） | 1.40 | 1.35 | 1.30 | 1.25 | 1.20 | 1.15 | 1.10 | 1.05 | 1.00 | 1.50 |
致敏紅細(xì)胞（ml） | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
結(jié)果測定：取出試管，2000r/min 離心10分鐘，對照管應(yīng)不溶血。肉眼比色，選與
50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管相近二管，再用分光光度計(jì)測（波長542nm、0.5cm比色杯）OD 值，確定與標(biāo)準(zhǔn)管接近者為終點(diǎn)管，然后按下公式計(jì)算CH50值：血清補(bǔ)體CH50 ( U /ml)=(1／血清用量）x 稀釋度。
如第5管為終點(diǎn)管，測待測血清中 CH50為66.7U/ml 。血清補(bǔ)體CH50正常值為50-100U/ ml 。
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