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兔抗綿羊紅細(xì)胞(溶血素)的使用介紹

更新時(shí)間:2023-10-27   點(diǎn)擊次數(shù):255次

兔抗綿羊紅細(xì)胞(溶血素)的使用介紹


利用綿羊細(xì)胞與相應(yīng)抗體(溶血素)結(jié)合成的復(fù)合物,可激活血清中的補(bǔ)體,導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解,當(dāng)紅細(xì)胞和溶血素量一定時(shí),在規(guī)定反應(yīng)的時(shí)間內(nèi),溶血程度與補(bǔ)體量及活性呈正相關(guān)。在接近50%溶血(CH50)時(shí),二者之間近似直線關(guān)系,故以50%溶血作為最敏感的判斷終點(diǎn)。以引起50%溶血所需的最小補(bǔ)體量為一個(gè) CH50U,可計(jì)算出待測血清中總的補(bǔ)體溶血活性,以 CH50U /ml表示。

產(chǎn)品全稱:凍干兔抗綿羊紅細(xì)胞(凍干溶血素)

規(guī)格:0.5ml*10支

效價(jià):1:4000

批號:20230511

保存:-20℃,避光保存,避免反復(fù)凍融

有效期:12個(gè)月

使用方法:臨用前,每瓶加去離子水或者雙蒸水0.5ml重建后立即使用(10小時(shí)內(nèi)),不得反復(fù)使用。

相關(guān)實(shí)驗(yàn)測定步驟:(僅供參考)

本試驗(yàn)主要反映補(bǔ)體經(jīng)典活化途徑的溶血功能,其結(jié)果與補(bǔ)體C1~C9各組成分的量及活性均有關(guān)。

1.試劑及配制

(1)緩-沖生理鹽水:

①貯存液:

Na2HPO4·12H20   2.85g

KH2PO4               0.27g (加蒸餾水至100毫升,4℃保存)

NaCl                    17.00g

②應(yīng)用液(緩沖液):5毫升貯存液加95毫升蒸餾水,再加10%硫-酸鎂0.1毫升。當(dāng)日配制。12小時(shí)內(nèi)使用。

(2)2%綿羊紅細(xì)胞:無菌采取綿羊血液,于等量Alsever液中可保存3周。用前以緩沖液

洗3次,并配成2%細(xì)胞懸液。必要時(shí)可用吸光光度法或細(xì)胞計(jì)數(shù)法使懸液細(xì)胞濃度標(biāo)準(zhǔn)化。

(3)溶血素:將本品(效價(jià)1:4000),用緩沖液做1:2000倍稀釋(即1ml溶血素加1999毫升緩沖液)。

(4)待測血清:新鮮血液室溫放置30分鐘,再4℃放置60分鐘,收縮。4℃離心

(3000r/min )10分鐘,取上清,-20℃保存。

2.試管法操作步驟(改良 Mayer 法)

(1)致敏羊紅細(xì)胞:2%綿羊紅細(xì)胞加等量稀釋后的溶血素(1:2000),混勻,置37℃水浴30分鐘。

(2)稀釋血清:待測血清0.2ml,加緩沖液3.8ml,稀釋度為1:20。

(3)配制溶血標(biāo)準(zhǔn)管:2%綿羊紅細(xì)胞2ml加8ml蒸餾水,混勻,即為全溶血管。取全溶血管液2ml加緩沖液2m1,即為50%溶血管。

(4)按表所示,依次加各成分于試管中,混勻,置37℃水浴30分鐘。第10管為非溶血對照。


             補(bǔ)體 CH50 測定試管法

 

成分

試管號

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

1:20待測血清

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30

0.35

0.40

0.45

0.50

-

緩沖液(ml

1.40

1.35

1.30

1.25

1.20

1.15

1.10

1.05

1.00

1.50

致敏紅細(xì)胞(ml

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1










結(jié)果測定:取出試管,2000r/min 離心10分鐘,對照管應(yīng)不溶血。肉眼比色,選與

50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管相近二管,再用分光光度計(jì)測(波長542nm、0.5cm比色杯)OD 值,確定與標(biāo)準(zhǔn)管接近者為終點(diǎn)管,然后按下公式計(jì)算CH50值:血清補(bǔ)體CH50 ( U /ml)=(1/血清用量)x 稀釋度。

如第5管為終點(diǎn)管,測待測血清中 CH50為66.7U/ml 。血清補(bǔ)體CH50正常值為50-100U/ ml 。


兔抗.png


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