葡聚糖凝膠G系列使用說明-上海信帆生物
更新時(shí)間:2022-09-08 點(diǎn)擊次數(shù):607次葡聚糖凝膠G系列使用說明-上海信帆生物
上海信帆生物供應(yīng)葡聚糖凝膠G系列產(chǎn)品,備有大量庫存現(xiàn)貨,質(zhì)量穩(wěn)定。
此說明僅限參考
葡聚糖凝膠G 系列使用說明
1 化學(xué)和物理性質(zhì)
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。親水基質(zhì)使其
非特異性吸附最小化,并在生物分子分離期間得到較高的回收率。G 型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度,
因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影
響。
2 產(chǎn)品說明
產(chǎn)品名稱球蛋白分離范圍應(yīng)用最大耐壓MPa
葡聚糖凝膠G-10<700 緩沖液交換、脫鹽,分離小分子,去除小分子0.15
葡聚糖凝膠G-15<1500 緩沖液交換、脫鹽,分離小分子,去除小分子0.15
葡聚糖凝膠G-25 1000-5000 工業(yè)上脫鹽及交換緩沖液0.15
葡聚糖凝膠G-50 1000-30000 多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測(cè)定0.10
葡聚糖凝膠G-75 2000-70000 蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定0.016
葡聚糖凝膠G-100 2000-120000 蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定0.0096
葡聚糖凝膠G-150 5000-300000 蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定0.0096
葡聚糖凝膠G-200 5000-600000 蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定0.0096
3 使用方法
Sephadex 系列產(chǎn)品以干粉形式存在,使用前必須溶脹,在膨脹期間應(yīng)避免過度攪拌,因?yàn)樗赡芷?/p>
壞填料,不要使用磁力攪拌器。
3.1 填料的準(zhǔn)備
(1)將填料在過量去離子水或緩沖液中,室溫條件下膨脹24 小時(shí),或用熱水膨脹1 小時(shí)(不要水?。。?。
洗脫緩沖液不應(yīng)含有高粘度的試劑。溶脹過程中,如果上層有漂浮物,請(qǐng)去除。
(2)將溶脹好的填料,所有的緩沖液等材料平衡至實(shí)驗(yàn)操作溫度,對(duì)所有的緩沖液進(jìn)行脫氣處理。
3.2 裝柱
(1)檢查層析柱所有部件,特別是過濾網(wǎng),密封圈,螺旋塞是否緊密,玻璃管是否干凈和完整。
(2)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位,務(wù)必使底端無氣泡。
(3)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠
在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。
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(4)打開蠕動(dòng)泵,讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33 倍的流速流過,使柱床穩(wěn)定(注意壓力不要超過填
料最大耐壓)。
3.3 平衡
上樣前平衡層析柱至少5-10 個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的pH 值和電導(dǎo)值等于
上柱的Buffer 的pH 值和電導(dǎo)值)。
3.4 上樣
樣品一定要離心或過濾后(0.45um 濾膜)上樣。
凝膠過濾的上樣量一般為不大于5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的柱床體積,視分
離情況可以調(diào)整;脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱子越高,分
離效果相應(yīng)越好,但是,柱高過高的凝膠柱會(huì)引起的反壓,也應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定
柱高和流速控制,脫鹽時(shí)高徑比為5:1 即可。
3.5 洗脫方法
可以用無鹽水,也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫。
3.8 在位清洗(CIP)
凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是用0.1 M 氫氧化
鈉洗2 個(gè)柱體積,再以至少10 個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。
4 保存
未處理的填料,室溫密閉保存。使用完的填料,用純水將鹽分*沖洗,最后保存在20%乙醇中,4℃
保存。
5 注意事項(xiàng):
(1)上樣之前,樣品必須經(jīng)過膜過濾及去除色素,否則雜質(zhì)及色素會(huì)被吸附到填料上,影響填料的
正常使用。所有的緩沖液均需要用0.45um 的過濾器過濾。
(2)在使用過程中,避免使用高濃度的強(qiáng)酸強(qiáng)堿,酸和堿的濃度應(yīng)低于0.1 摩爾。堿會(huì)使流速變慢。
(3)不同的樣品,吸附和洗脫方法不相同,可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。
6 不同規(guī)格特性
細(xì)顆粒:流速慢,分離效果優(yōu)。
粗顆粒:流速快,分離效果偏差。
中顆粒:流速適中,分離效果適中,一般客戶最常選用此型號(hào)。
葡聚糖凝膠G系列