做Western Blot實驗的時候,細(xì)胞樣本應(yīng)該如何處理
更新時間:2021-02-19 點擊次數(shù):2624次做Western Blot實驗的時候,細(xì)胞樣本應(yīng)該如何處理
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細(xì)胞樣本做WB檢測
1、懸浮細(xì)胞樣品:把細(xì)胞及培養(yǎng)液一起收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
2、貼壁細(xì)胞樣品:
2.1 胰酶消化:用胰酶將細(xì)胞消化后,收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
2.2 細(xì)胞刮子收集細(xì)胞:對于某些蛋白(即對胰酶比較敏感或者實驗特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后進(jìn)行WB檢測),直接用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞,收集到EP、15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
做Western Blot實驗的時候,細(xì)胞樣本應(yīng)該如何處理