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WB實驗中細胞樣本應(yīng)該如何處理

更新時間:2020-11-03   點擊次數(shù):5247次

WB實驗中細胞樣本應(yīng)該如何處理

很多老師在做WB實驗的時候,經(jīng)常問細胞樣本應(yīng)該如果處理,下面上海信帆技術(shù)小編給大家講解一下吧!

樣品處理及保存

1、懸浮細胞樣品:

把細胞及培養(yǎng)液一起收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復(fù)2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測。

 

2、貼壁細胞樣品:


2.1 胰酶消化:用胰酶將細胞消化后,含血清的培養(yǎng)基中和胰酶,吹打,收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復(fù)2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測。


2.2 細胞刮子收集細胞:對于某些蛋白(即對胰酶比較敏感或者實驗特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后進行WB檢測),直接用細胞刮子刮下細胞,連同培養(yǎng)基收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復(fù)2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測。

WB實驗中細胞樣本應(yīng)該如何處理

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