上海信帆生物組織學習了T2毒素ELISA試劑盒檢測流程
更新時間:2020-07-17 點擊次數(shù):751次上海信帆生物組織學習了T2毒素ELISA試劑盒檢測流程
上海信帆生物本月組織學習了T2毒素ELISA試劑盒操作流程,讓公司員工對該試劑盒有了一個全新的認識,對檢測步驟和方法也有了更加深入的了解,對于大家來說對以后的組織開展工作都有了一個提高,讓大家都對產(chǎn)品更加清楚明了。
下面我們跟著上海信帆生物一起來了解一下今天的學習內容吧!
T-2 毒素(T-2 Toxin)ELISA 檢測試劑盒
【概要】T-2 毒素是一類單端孢霉烯族真菌毒素(trichothecenes)中一個具有代表性的毒素。這類真菌廣泛地生存于土壤、植物和其他基質上,侵染麥類、玉米等田間作物,除使谷物減產(chǎn)外,還能生有毒物質,人畜食后,可引起中毒?,F(xiàn)在主要有薄層、氣相、高壓液相、質譜等方法。酶免檢測分析方法具有方法穩(wěn)定、試劑便于保存、靈敏度高的優(yōu)點,成為重要的定性定量的分析方法之一。
【適用范圍】
本試劑盒可定性、定量檢測玉米、玉米粉、玉米胚芽及其制品和飼料中的T-2 毒素。
【試驗原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA 方法,在酶標板微孔條上預包被T-2 毒素抗原,樣本中T-2 毒素和此抗原競爭結合抗T-2 毒素抗體(抗試劑),同時抗T-2 毒素抗體與酶標二抗(酶標物)相結合,經(jīng)TMB 底物顯色,樣本吸光值與其所含T-2毒素的含量成負相關,對照標準曲線,再乘以其對應的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中T-2 毒素的含量。
【試劑盒組成】
1. 96 孔板(8 孔*12 條)
2. T-2 毒素標準溶液×6 瓶:(1.5mL/瓶)
0 ng/mL,2.5 ng/mL, 5 ng/mL,10ng/mL,20 ng/mL,40 ng/mL
3. T-2 毒素酶標物1 瓶.....................................................6mL
4. T-2 毒素抗試劑1 瓶....................................................6mL
5. 底物液1 瓶.....................................................................6mL
6. 顯色液1 瓶.....................................................................6mL
7. 終止液1 瓶....................................................................6mL
8. 濃縮洗滌液(20×)1 瓶......................................... 20mL
9. 反應板支架..................................................................1 塊
注:48 孔型號試劑盒內容物數(shù)量、體積略有差別。
【需要而未提供的設備和試劑】
----酶標儀450nm
----振蕩器
----離心機
----粉碎機
----天平:感量0.01g
----微量移液器:單道20?L~200?L、100?L~1000?L
----甲醇
----去離子水
注:以上儀器均可代購
【試劑配制】
洗滌工作液: 將濃縮洗滌液用去離子水按1:19 體積比進行稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水)。70%甲醇水:取無水甲醇,用去離子水按7:3 體積比例稀釋(7份無水甲醇+3 份水)。
【樣本前處理步驟】
玉米及其制品、飼料原料及成品(稀釋倍數(shù):28)
1. 取5.0g 粉碎好的樣品,加入20mL 70%甲醇水,混勻;
2. 充分振蕩15min 后過濾或4000rpm 離心5-10min;
3. 將濾液或上清液用去離子水以1:6 稀釋(例:0.5mL 濾液+3mL 去離子水),充分混勻后即為待測樣液;
4. 稀釋后的待測樣液需pH 值約7.0 左右,移取該液50uL進行檢測。
注意:若樣品中T-2 毒素偏高,建議將樣品提取液用10%甲醇-水再進一步稀釋后檢測。
【檢測步驟】
一、測定前須知:
1. 使用之前將所有試劑和所需板條回溫(20~25℃)。
2. 使用之后立即將所有試劑及剩余板條放置2~8℃。
3. ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA 操作中的要點。
4. 在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,可用蓋板膜蓋住微孔板。
二、操作步驟:
1. 將所需試劑及微孔板取出,放置室溫(20~25℃)30min以上,液體試劑使用前均須搖勻。
2. 取出所需數(shù)量的微孔板,將不用的微孔板放回鋁箔袋中,放置于2~8℃冷藏。不可冷凍。
3. 配置好的洗滌工作液在使用前也需回溫。
4. 將樣本和標準品對應微孔編號,建議每個樣本和標準品做2 孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5. 每孔加入250μL 左右洗滌液,洗滌液不得溢出,放置40s左右,甩掉洗滌液,在吸水紙上拍干。
6. 分別加入標準溶液/待測樣液50?L 到對應的微孔中,再加入酶標物50?L/孔,后加入抗試50?L/孔,輕輕震蕩混勻,遮蓋后37℃恒溫培養(yǎng)箱中反應30min。
7. 小心揭開蓋板,甩掉反應液,加入洗滌液250μL/孔充分洗滌5 次,每次間隔40s,用吸水紙拍干。
8. 每孔分別加入底物液和顯色液各50μL,輕輕震蕩混勻,遮蓋后37℃恒溫培養(yǎng)箱中顯色15min。
9. 加入終止液50?L/孔,輕輕震蕩混勻,設酶標儀于450nm處讀取每孔OD 值。(若無酶標儀,則不加終止用目測法可進行判定)。
【結果判定】
標準曲線的繪制與計算用酶標儀測得每孔的光密度值(A),繪制標準曲線。通過準曲線,可準確定量樣品中T-2 毒素含量。標準曲線:橫坐標為T-2 毒素標準濃度的對數(shù),縱坐標為百分比(即各標準品孔和樣品孔光密度值除以0 ng/mL 標準液孔光密度值(A0)再乘以%所得,光密度值(標準孔或樣品孔) /光密度值(A0)×%=%(縱坐標))。相應每個樣品的T-2 毒素濃度可從曲線上獲得。歡迎索取專門的數(shù)據(jù)處理
軟件進行計算。
備注:試劑盒初篩后,若出現(xiàn)陽性結果,建議用仲裁法進一步確證。
【注意事項】
1. 試劑及樣本沒有恢復到室溫(20~25℃)會導致所有標準的OD 值偏低。
2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標準曲線不成線性,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3. 每種試劑使用前均需搖勻。
4. 反應終止液為2M 硫酸,避免接觸皮膚。
5. 不要使用過了有效期的試劑盒;也不要摻雜使用過了有效期的試劑盒;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6. 儲存條件:試劑盒保存于2~8℃,不能冷凍,將不用的微孔板重新真空密封。標準物質和無色的顯色劑對光敏感,因此要避光保存。
7. 試劑變質的跡象:顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質,應當棄之。0 標準的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質。
8. 對玻璃器皿和T-2 毒素溶液消毒好用次氯酸鈉(10%,v/v)溶液浸泡過夜。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:該產(chǎn)品有效期為6 個月。生物試劑日期見包裝盒。
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