HRP標(biāo)記羊抗雞IgY如何正確使用
更新時(shí)間:2020-05-29 點(diǎn)擊次數(shù):1054次HRP標(biāo)記羊抗雞IgY如何正確使用
HRP標(biāo)記多克隆抗體是由山羊抗血清經(jīng)親和層析純化而得到高純度多克隆抗體。
一、試劑成分:
HRP* Polyclonal Goat Anti-Chicken Igy(IgG)H+L、50%甘油、PBS、穩(wěn)定劑、保護(hù)劑。
二、使用方法:
ELISA法建議在1:4000-20000選擇合適您實(shí)驗(yàn)的稀釋比例,也可根據(jù)您試驗(yàn)的具體情況在此建議的稀釋度范圍之外合適的使用,高可稀釋到數(shù)萬仍有使用價(jià)值。稀釋使用含0.2-0.5%BSA和0.05% 吐溫-20的0.01M的PBS(PH:7.0),也可使用其它正確的稀釋用液,原則上配成的工作液要一次使用完,不得多次使用。如確實(shí)要多次使用請?jiān)谂渲茣r(shí)加入合適的防腐劑與穩(wěn)定劑,并要求在2-8℃避光存放,但盡管如此也不要放置太久,以免對(duì)您的結(jié)果產(chǎn)生不良影響。因不良稀釋用液和存放而造成的損失不在投訴范圍。本品也可以用于免疫印記和免疫組化實(shí)驗(yàn)。
三、注意事項(xiàng):
1、雖然本試劑在有效期過后很長一段時(shí)間仍可以使用,但還是強(qiáng)烈建議您在管體規(guī)定的有效期內(nèi)正確使用。
2、請不要在臟亂和強(qiáng)光環(huán)境中取用,以免造成污染和失效。
3、如果一次使用很少可以將其適當(dāng)分裝后使用,這樣可以有效的防止試劑污染。
4、本二抗酶對(duì)雞其它Ig 有5-10%交叉性,也就是說跟IgM等類抗體也可以有一定反應(yīng)性,實(shí)際應(yīng)用良好。
四、批號(hào)和有效期:
請查看管體標(biāo)簽。
五、保存條件:
-20℃避光保存。
六、包裝規(guī)格:1ml。
七、產(chǎn)品濃度:1mg/ml
辣根過氧化物標(biāo)記的步驟。
答:1.1 試劑準(zhǔn)備
1) 10mg/mL HRP
2) 0.06mol/L NaIO4
3) 0.16mol/L乙二醇
4) 碳酸鹽緩沖液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸餾水中,調(diào)pH值到9.5)
5) 2.5mg/mL NaBH4
6) 0.01mol/L磷酸鹽緩沖液,pH7.4
1.2 操作步驟
1. 10mg/mL取HRP VmL,溶液為棕黃色,加入0.06mol/L NaIO4 VmL,立刻變?yōu)榛揖G色。靜置30min,4℃
2.加入0.16mol/L乙二醇VmL,溶液變回棕黃色,RT,靜置30min。
3.加入抗體Vml 5mg,CB,4℃透析過夜。
4.再加入5mg/mL NaBH4 VmL,加入后溶液有氣泡產(chǎn)生。室溫靜置2h。
5. 50%飽和硫酸銨鹽析一次,12000rpm,4℃離心30min。沉淀用5VmL 0.01mol/L PB重懸。裝入透析袋。
6. 溶液在0.01mol/L PB,pH7.4中透析過夜。
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