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細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒新品上市

更新時間:2019-10-31   點(diǎn)擊次數(shù):670次

細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒新品上市,上海信帆生物供應(yīng)細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒

產(chǎn)品描述

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 是基于CFDA, SE對細(xì)胞進(jìn)行示蹤及增殖檢測的試劑盒,由CFDA,SE粉末、溶劑及相關(guān)細(xì)胞染色緩沖液組成,該試劑盒主要工作原理為:CFDA, SE具有細(xì)胞膜滲透性,本身不具有熒光發(fā)光性。當(dāng)通過被動運(yùn)輸穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活細(xì)胞后,可被胞漿內(nèi)的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE),后者可發(fā)強(qiáng)烈的綠色熒光,不能穿透細(xì)胞膜,能完好的保留在胞內(nèi)。CFSE還可自發(fā)性并不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合從而偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上,同時過量且未被偶聯(lián)的CFDA, SE通過被動擴(kuò)散回到細(xì)胞外培養(yǎng)基內(nèi),被后續(xù)清洗步驟所清除。經(jīng)CFDA, SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定,穩(wěn)定標(biāo)記的時間可達(dá)數(shù)月,因此非常適用于細(xì)胞群落分析。

CFDA, SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一,優(yōu)于以前使用的其他細(xì)胞示蹤熒光探針如PKH26,并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過程中,CFSE 標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細(xì)胞中,熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半,通過流式細(xì)胞儀(FL1通道)根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同,可檢測出未分裂細(xì)胞,分裂一次(1/2的熒光強(qiáng)度),二次(1/4的熒光強(qiáng)度),三次(1/8的熒光強(qiáng)度),以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。CFSA,SE可檢測分裂次數(shù)多達(dá)八次甚至更多。經(jīng)CFDA, SE標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究,且具有不會使鄰近細(xì)胞染色的功能。CFDA, SE常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測,也可用于成纖維細(xì)胞,自然殺傷細(xì)胞,造血祖細(xì)胞等其他細(xì)胞的增殖檢測。

CFDA, SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光,Ex=494 nm,Em=521 nm,除了流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞增殖外,還可用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目,或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。

本品為CFDA,SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒,包含配制CFDA,SE儲存液所需的溶劑和細(xì)胞標(biāo)記用的染色緩沖液,簡化了實驗前期準(zhǔn)備工作。另,CFDA,SE標(biāo)記細(xì)胞一般15 min即可完成,對于不同細(xì)胞,需要自行摸索佳標(biāo)記時間。按照每個樣本的標(biāo)記體積為2 mL計算。對應(yīng)貨號40714ES76和40714ES80的試劑盒可分別進(jìn)行500次和1000次檢測。


產(chǎn)品組分

組分編號

組分名稱

產(chǎn)品編號/規(guī)格

4ES76(500 T)

4ES80(1000 T)

40714-A

CFDA,SE 熒光探針

1管×2

1管×4

40714-B

CFDA,SE 溶劑

500 µL×2

500 µL×4

40714-C

細(xì)胞染色緩沖液(5×)

200 mL×1

200 mL×2

運(yùn)輸與保存

冰袋運(yùn)輸。-20℃干燥避光保存,有效期1年。


注意事項

1)CFDA,SE易被水解,在水溶液中會很快變質(zhì)。因此保存過程中粉末或者儲存液都需干燥保存;而且使用過程中避免接觸水。但在標(biāo)記細(xì)胞的過程中和水接觸是在許可范圍內(nèi)的。

2)CFDA,SE溶劑在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),于20-25℃水浴溫育片刻至全部溶解后方可使用。

3)不同的細(xì)胞其細(xì)胞內(nèi)酯酶活性不同,因此染色效果具有差異性。

4)雖然本試劑盒已對CFDA,SE染色體系做了優(yōu)化處理,但建議使用者根據(jù)自身的細(xì)胞類型,培養(yǎng)條件以及應(yīng)用的不同來梯度摸索佳的工作濃度,以低濃度得到適宜的標(biāo)記效率為準(zhǔn)。

5)熒光染料均存在淬滅問題,染色過程需盡量避光。

6)為了您的健康,實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。


操作方法

1.  CFDA,SE儲存液(1000×)的配制

加入500 µL CFDA,SE溶劑到1管CFDA,SE熒光探針中進(jìn)行溶解,充分混勻即得到1000×的儲存液。

注意:該儲存液好在1個月內(nèi)使用完畢,長不超過2個月。剩余儲存液請務(wù)必分裝后于≤-20℃避光干燥保存,避免反復(fù)凍融,-70℃避光保存可適當(dāng)延長保存周期。

2.  2×CFDA,SE工作液的配制

取適當(dāng)體積的細(xì)胞染色緩沖液(5×),用無菌的去離子水進(jìn)行5倍稀釋,配制成1×細(xì)胞染色緩沖液,并利用該緩沖液對上述CFDA,SE(1000×)儲存液進(jìn)行500×稀釋,如取2 μL CFSE儲存液加入到1 mL 1×細(xì)胞染色緩沖液中,混勻后即可得到2×CFDA,SE染色工作液。【注意】:雖然本試劑盒已對CFDA,SE染色體系做了優(yōu)化處理,但建議使用者根據(jù)自身的細(xì)胞類型,培養(yǎng)條件以及應(yīng)用的不同來梯度摸索佳的工作濃度,以低工作濃度得到適宜的標(biāo)記效率為準(zhǔn)。

1.操作步驟

1)離心收集細(xì)胞,利用1 mL 1×細(xì)胞染色緩沖液懸浮細(xì)胞于15 mL離心管,并調(diào)整細(xì)胞濃度為1-5×106個/mL;

2)把1 mL CFDA,SE工作液(2×)加入到上述15 mL離心管內(nèi),輕輕混勻。

3)37℃孵育10 min。
注意:對于不同細(xì)胞,需要自行摸索佳標(biāo)記時間。

4)立即在15 mL離心管內(nèi)加入約10 mL*細(xì)胞培養(yǎng)液(含10% FBS),室溫顛倒數(shù)下混勻,以終止標(biāo)記反應(yīng)。

5)室溫離心去上清,再用5-10 mL*細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一次。

6)再加入5-10 mL*細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃孵育10 min,以促進(jìn)CFSE【酯酶催化CFDA,SE得到的熒光產(chǎn)物】在細(xì)胞內(nèi)的駐留及未反應(yīng)的CFDA,SE進(jìn)入*細(xì)胞培養(yǎng)液。離心去上清,完成后一次洗滌。

7)此時標(biāo)記好的細(xì)胞已可進(jìn)行后續(xù)的體外增殖檢測或者特定目的的細(xì)胞示蹤。按照正常方法培養(yǎng)細(xì)胞,然后在合適的時間點(diǎn)用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀【FL1通道】進(jìn)行結(jié)果分析,呈綠色熒光。標(biāo)記的細(xì)胞也可用于活體動物的移植,并用熒光進(jìn)行示蹤。

注意:若需要對細(xì)胞進(jìn)行固定,請用醛類固定劑如3.7%多聚甲醛于室溫固定15 min;之后若還需要進(jìn)行其他如抗體標(biāo)記,請用冰丙酮透化處理細(xì)胞10 min。

細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒新品上市

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