Tn5轉(zhuǎn)座酶現(xiàn)貨供應(yīng)-上海信帆生物
更新時(shí)間:2019-10-23 點(diǎn)擊次數(shù):1035次Tn5轉(zhuǎn)座酶現(xiàn)貨供應(yīng)-上海信帆生物
上海信帆生物供應(yīng)Robust Tn5 轉(zhuǎn)座酶,產(chǎn)品現(xiàn)貨供應(yīng),大家有需要可以隨時(shí)咨詢!
Robust Tn5 轉(zhuǎn)座酶
Robustnique
體外轉(zhuǎn)基因操作:
Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶可以將含有成對(duì)識(shí)別序列的雙鏈DNA段(如下圖所示)隨機(jī)整合到宿主細(xì)胞的基因組中。整合的過程分為兩步:
首先,Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶同含有選擇標(biāo)記和識(shí)別序列的目標(biāo)基因片段結(jié)合,形成轉(zhuǎn)座體(Transposome);之后,通過轉(zhuǎn)化的方式將
轉(zhuǎn)座體導(dǎo)入宿主細(xì)胞,利用選擇標(biāo)記篩選成功整合目標(biāo)基因的宿主細(xì)胞。
核酸外切酶活性:50 μl反應(yīng)體系中,20 U本酶與1 μg的pUC19質(zhì)粒于37°C下溫育4小時(shí),DNA的電泳條帶無明顯變化。
RNase活性:50 μl反應(yīng)體系中,100 U本酶與250 ng大腸桿菌rRNA于37°C溫育2小時(shí),經(jīng)瓊脂糖電泳檢測(cè),被降解的rRNA小于1%。
1. Zhou, M., Bhasin, A., and Reznikoff, W. S. (1998) J. Mol. Biol. 276, 913-925.
2. Ason, B., Reznikoff, W. S. (2004) J. Mol. Biol. 335, 1213-1225.
質(zhì)量控制檢測(cè):
參考文獻(xiàn):
應(yīng)用:
概述:Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶是野生型Tn5轉(zhuǎn)座酶的高活性突變體,可以的將Tn5轉(zhuǎn)座子插入到目標(biāo)序列。Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶識(shí)別Tn5
轉(zhuǎn)座子酶序列的內(nèi)端(inside end,IE)、外端(outside end,OE)和嵌合端(mosaic end,ME)序列,含有ME序列片段的體外轉(zhuǎn)
座效率高(1)。Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶的插入位點(diǎn)具有很高的隨機(jī)性(2) ,因此被廣泛的用于體外轉(zhuǎn)基因(外源基因整合到宿主細(xì)胞)和二代
測(cè)序建庫等領(lǐng)域。
來源:含有Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶序列的大腸桿菌菌株。
應(yīng)用:體外轉(zhuǎn)基因(外源基因整合到宿主細(xì)胞),二代測(cè)序建庫。
貯存溶液:50 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25 °C),100 mM NaCl,0.1 mM EDTA,0.1% Triton X-100和50%甘油(V/V)。
反應(yīng)緩沖液:(隨酶提供)10x轉(zhuǎn)座反應(yīng)緩沖液。
單位定義:1單位Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶指37°C條件下反應(yīng)1小時(shí),*切割1 μg含有識(shí)別序列的DNA段所需要的酶量。
重組酶
包裝:
濃度:
存儲(chǔ):
25 U
1,000 U/ml
-20°C
該反應(yīng)體系可根據(jù)需要進(jìn)行放大。
1.2 充分混勻,室溫(25 °C )放置30分鐘。
1.3 取1-4 μl反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行后續(xù)的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),反應(yīng)產(chǎn)物也可放置于-20°C備用。
2 轉(zhuǎn)化
可以使用的轉(zhuǎn)化方法有電轉(zhuǎn)化,化學(xué)轉(zhuǎn)化等。轉(zhuǎn)化后利用選擇性標(biāo)記篩選成功整合目標(biāo)基因的宿主細(xì)胞。
1 轉(zhuǎn)座體(Transposome)的構(gòu)建*
1.1 準(zhǔn)備如下反應(yīng)體系:
成分
目標(biāo)基因片段(含選擇標(biāo)記和成對(duì)識(shí)別序列,100 μg/ml)
Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶
100%甘油
體積
2 μl
4 μl
2 μl
Robust Tn5 轉(zhuǎn)座酶現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎搶購
TnsABC*轉(zhuǎn)座酶可用在GPSTM系列系統(tǒng)中(GPS-1基因組測(cè)序系統(tǒng),GPS-M突變系統(tǒng)和GPS-LS蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析系統(tǒng))將pGPS質(zhì)粒中的Transprimer轉(zhuǎn)座元件體外隨機(jī)插入到任何期望的靶DNA內(nèi)(1-3)。
來源
三個(gè)組成蛋白分別從含有編碼TnsA、TnsB和TnsC*的質(zhì)粒的E.coliK-12中純化獲得。
應(yīng)用
用于GPS系統(tǒng)中所用到的Tn7源轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)位。
反應(yīng)緩沖液
1×GPSBuffer25mMTris-HCl,2mMATP,2mMDTT(pH8.0@25°C)。補(bǔ)充15mM鏈轉(zhuǎn)移反應(yīng)起始溶液。37°C溫育。
單位定義
在用0.08µg2.8kb對(duì)照質(zhì)粒的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照反應(yīng)體系中,能使至少1%的靶分子獲得轉(zhuǎn)座子插入所需要的酶量定義為一個(gè)單位。
熱失活:75°C10分鐘。
Tn5轉(zhuǎn)座酶現(xiàn)貨供應(yīng)-上海信帆生物