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人饑餓素 ghrelin ELISA試劑盒的基本知識

更新時間:2017-10-11   點擊次數(shù):760次

人饑餓素 ghrelin ELISA試劑盒的基本知識

產(chǎn)品中文:人饑餓素 (ghrelin) ELISA試劑盒
產(chǎn)品英文:RAT IL-2 ELISA KIT
規(guī)格:48T/96T
保質(zhì)期:6個月
保存條件:2到8度
ELISA技術(shù)原理:以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來.
1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
2. 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。
3. 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
4. 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記 的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
5. 此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
6. 加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量 與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定 性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平),并且重復(fù)性好。
標(biāo)本的保存:
 
人饑餓素 ghrelin ELISA試劑盒的基本知識

樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑
( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右
( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成,應(yīng)再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
一般說來,在 5 天內(nèi)測定的標(biāo)本可放置于 4℃,超過一周測定的需低溫凍存。 對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本,儲存在 4 ℃ 備用,如有特殊原因需要周期收集標(biāo)本,將標(biāo)本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時, -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度可保存 6 個月。部分標(biāo) 本也可加入適當(dāng)防腐劑,激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。
 
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