人Ⅲ型膠原(PⅢP)elisa試劑盒是啥?
更新時間:2017-08-04 點擊次數(shù):804次人Ⅲ型膠原(PⅢP)elisa試劑盒基本信息
Ⅲ型膠原蛋白,PⅢP,Ⅲ型前膠原經(jīng)氨基端內(nèi)切肽酶。
中文名 Ⅲ型膠原蛋白
正常值 0.6μg/ml
簡 稱 PⅢP
作用酶 Ⅲ型前膠原經(jīng)氨基端內(nèi)切肽酶
1979年國外已建立測定血清PⅢP的放射免疫法(RIA),并證實肝纖維化時血清PⅢP含量與肝炎癥,壞死和肝纖維化有關(guān),但以肝纖維化相關(guān)為主,因此血清PⅢP仍然是肝纖維化的重要標(biāo)記物。PⅢP對于診斷兒童肝疾病沒有意義,它隨兒童年齡的增長有所升高。許多學(xué)者報道,血清PⅢP是反應(yīng)成人肝纖維化活動的良好指標(biāo),可彌補(bǔ)肝活檢不能動態(tài)觀察等不足。肝硬化患者明顯升高,但在肝硬化晚期,因Ⅲ型前膠原肽合成率降低,血清中PⅢP反而低于早期。PⅢP在區(qū)別慢性活動性肝炎與慢性遷延性肝炎有良好的幫助,慢性肝PⅢP水平明顯升高,而在慢遷肝其含量與正常人無明顯差別。
人Ⅲ型膠原(PⅢP)elisa試劑盒如何操作
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
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