大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒知識(shí)普及
更新時(shí)間:2017-08-02 點(diǎn)擊次數(shù):1180次大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒基本信息簡(jiǎn)介
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)是指兩類(lèi)多肽類(lèi)生長(zhǎng)因子,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α是由巨噬細(xì)胞,腦細(xì)胞和表皮細(xì)胞產(chǎn)生,可誘導(dǎo)上皮發(fā)育。人類(lèi)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β有三個(gè)亞型,TGF-β1,TGF-β2,TGF-β3。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β (Transforming growth factor beta, TGF-β)是一多功能蛋白質(zhì),可以影響多種細(xì)胞的生長(zhǎng),分化、細(xì)胞凋亡及免疫調(diào)節(jié)等功能。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β超家族蛋白。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β可以結(jié)合到細(xì)胞表面的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β受體結(jié)合而激活其受體。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β受體是絲氨酸/蘇氨酸激酶受體。其信號(hào)傳遞可以通過(guò)SMAD信號(hào)通路和/或DAXX信號(hào)通路。
大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)條件簡(jiǎn)介
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
?。?) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。
?。?) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿(mǎn)意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
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