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小鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)elisa試劑盒居然可以這么用

更新時間:2017-07-31   點(diǎn)擊次數(shù):939次

小鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)elisa試劑盒簡介

是重要的抗纖維化因子,能修復(fù)受損肺組織,是重要的保護(hù)性因子。肝細(xì)胞生長因子是目前已知生物活性zui廣泛的生長因子之一,能刺激多種上皮和內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂、運(yùn)動以及促進(jìn)腎小管形態(tài)發(fā)生,在組織器官損傷修復(fù)、形態(tài)發(fā)生和腫瘤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用,在腎臟的發(fā)育、急性損傷、再生中具有較強(qiáng)的作用。

小鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)elisa試劑盒操作方法

實(shí)驗(yàn)開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。

為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。

5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。

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