皮質(zhì)醇(CORT)放免試劑盒-*
更新時間:2016-07-25 點擊次數(shù):1487次皮質(zhì)醇(CORT)放免試劑盒-*
皮質(zhì)醇放射免疫試劑
預(yù)期用途:
用于體外診斷。
該藥盒定量檢測血清、血漿及尿液中皮紙醇的水平。
摘要:
皮質(zhì)醇是腎上腺皮質(zhì)分泌的zui主要的糖皮質(zhì)激素,其生理效應(yīng)為抗炎癥活
性,維持血壓和由蛋白合成糖的過程。
糖皮質(zhì)激素在促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)的刺激下合成。ACTH 由垂體前
葉分泌。在一般個體中,ACTH 存在時,皮質(zhì)醇通過下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)這
個軸線(HPA 軸線)參與一個負(fù)反饋循環(huán),而垂體ACTH 是受下丘腦分泌的ACTH
釋放因子(CRF)調(diào)控的,下丘腦CRF 受皮質(zhì)醇水平的影響產(chǎn)生應(yīng)激。生理及
心理上的應(yīng)激,晝夜變化和低血糖又影響著皮質(zhì)醇的分泌速度。
HPA 軸上每個器官出現(xiàn)問題都會導(dǎo)致皮質(zhì)醇水平發(fā)生變化,用血清或血漿
中皮質(zhì)醇的水平來衡量腎上腺功能狀況有助于常規(guī)和非常規(guī)診斷。早晚檢測與刺
激和抑制試驗結(jié)合起來可為特殊的腎上腺疾病診斷提供有利依據(jù)。阿狄森氏病
(慢性腎上腺皮質(zhì)機(jī)能減退癥)以及柯興氏綜合癥(腎上腺皮質(zhì)分泌過盛)的診
斷就是循環(huán)中皮質(zhì)醇水平的特異分析有助于診斷的兩個例子。
方法原理:
該方法以放射免疫測定的競爭性結(jié)合原理為基礎(chǔ)。標(biāo)準(zhǔn)品和未知樣品包被管
中一起溫育,抗體包被于試管底部。溫育后將管內(nèi)物質(zhì)吸出或倒出,計數(shù)。在1~
60μg/dl 范圍內(nèi),以5 個血清標(biāo)準(zhǔn)坐標(biāo)準(zhǔn)曲線,未知樣品值可從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得。
整個反應(yīng)在包被管中進(jìn)行。對于血清,尿液或血漿樣本來說,未分離樣本的稀釋,
蛋白質(zhì)的變性或提取步驟是必須的。
除了非提取尿皮質(zhì)醇分析外,該藥盒也可用于尿液中游離皮質(zhì)醇的測定。首
先用亞甲基氯化物提取尿液中皮質(zhì)醇,將提取物的一個等份式樣在包被管中直接
脫水(試驗證明如果使用的亞甲基氯化物,不會有損于包被管)。為確保樣
本中含有適當(dāng)水平的蛋白質(zhì),向每個包被管中加入10μl 皮質(zhì)醇血清空白,其余
測定過程同血清,血漿和非提取尿皮脂醇。應(yīng)監(jiān)控使用亞甲基氯化物提取尿中皮
)
質(zhì)醇的效率。
試劑:
規(guī)格:CA-1529-100T
CA-1549-500T
緩沖液的介紹看試劑制備部分。所有試劑(包括緩沖液)在2~8℃下貯存,
保質(zhì)期內(nèi)是穩(wěn)定的。包被管可貯存在2~27℃,不要使用過期試劑。每一藥盒的
組分首先指的是100T,然后指的是500T。
1. 125I 皮質(zhì)醇標(biāo)記物
Cat.No. CA-2649
每盒1 瓶/5 瓶
每瓶有10ml 磷酸鹽緩沖液,內(nèi)含大約4μCi 標(biāo)記物(<1μg/ml 皮質(zhì)醇),
以0.1%爹氮化鈉作為防腐劑的ANS(8-Anili-萘磺酸)。
2. 兔抗皮質(zhì)醇血清包被管
Cat.No. CA-2167
每盒100T/500T
12×75mm 包被管,并用一塑料包包裝。
3. PBS 緩沖液
Cat.No. CA-2715
每盒1/5
每小瓶含有100ml 磷酸鹽緩沖液,0.1%*作為防腐劑。
4. 皮質(zhì)醇血清空白
Cat.No. CA-236
每小瓶含1ml 處理過的人血清,0.1%*作為防腐劑。
5. 皮質(zhì)醇血清標(biāo)準(zhǔn)
Cat.No. CA-2358,CA-2359,CA-2370,CA-2371,CA-2372
每盒1/5
每小瓶有1ml 處理過的血清,內(nèi)含皮質(zhì)醇,0.1%*作為防腐劑,所
供標(biāo)準(zhǔn)品濃度如下:分別為1、3、10、25 和60μg/dl
6. 備用標(biāo)簽
每盒1/5
7. 可選
半對數(shù)繪圖紙
每盒50 張。
警告和預(yù)防措施
用于體外診斷
不適于人和動物外服或內(nèi)用。
潛在傳染源的處理:
在制備本產(chǎn)品中所使用的每一血清和血漿捐獻(xiàn)者單位,均已采用FDA 提供
的方法測試過,發(fā)現(xiàn)對存在的HbsAg,HCV 抗體和HIV 抗體均無反應(yīng)。盡管這
些方法具有高度的準(zhǔn)確性,但也無法保證能發(fā)現(xiàn)所有的感染單位。本產(chǎn)品仍可能
含有其他能通過測試的人源物質(zhì)。因此,沒有已知的測定方法可以給出滿意的保
證(既保證不存在乙肝病毒,丙肝病毒和HIV 病毒或其他傳染因素),因而其
使用和運輸必須在良好的實驗規(guī)程和適當(dāng)?shù)姆佬l(wèi)措施下,按照國家相關(guān)政策進(jìn)
行。
含*的試劑:
警告:本藥盒中部分試劑含有*,*可與含銅、鉛的裝置反應(yīng)
形成易爆炸的金屬疊氮化物,其處理是沖入大量的水以防止疊氮化物的積聚,更
進(jìn)一步的資料參閱“Decontamination of Laboratory Sink to Remove Azide Salts”
含125I 的試劑:
此試劑含有放射性物質(zhì),其運輸和使用應(yīng)在適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施及良好的實驗規(guī)
程下進(jìn)行。
1 其貯存應(yīng)被限制在特定地點
2 對其接近限定為被授權(quán)本人
3 禁止用嘴吸取放射性物質(zhì)
4 禁止在放射性工作地點吃飯或飲水
5 擦凈可能發(fā)生溢出的地方,再用堿性去污劑或放射性去污溶液清洗。任何
使用過的玻璃器具在清洗其它實驗室玻璃器具前,必須用清水*清洗干凈。
領(lǐng)取從事放射性的實驗人員或機(jī)構(gòu)應(yīng)持有的特定許可證
警告:此產(chǎn)品含有加利福尼亞州所知的致癌物
注意:印于包裝上的放射性與印于盒子標(biāo)簽及標(biāo)記物小瓶標(biāo)簽上的放射性有
輕微區(qū)別。盒子標(biāo)簽和標(biāo)記物小瓶標(biāo)簽表明校準(zhǔn)日起的準(zhǔn)確放射性數(shù)量,而包
裝上表明的是試劑盒的理論放射性數(shù)量。
試劑的配制:
將小瓶內(nèi)的標(biāo)記物加入到1 瓶磷酸鹽緩沖液中,充分混勻后,用混合液沖洗
標(biāo)記物瓶以zui大限度的轉(zhuǎn)移標(biāo)記物。將混合液裝入易識別的容器中,貼上備用標(biāo)
簽,將其置于黑暗中保存或用金屬箔包裹,溫度控制在2~8℃。
樣品要求:
樣品的收集和處理:
血漿樣本:
靜脈取血放在含有肝素或DETA 的試管中,分理處小分血漿,2~8℃冷藏可過
夜,長時間則學(xué)–20℃凍存。避免使用溶血、脂血和黃疸性血樣。
血清樣本:
盡管皮質(zhì)醇檢測通常使用血漿樣本,但也可使用血清樣本獲得相似結(jié)果。
靜脈取血放在試管中,不用任何添加劑。分離出血清部分,2~8℃冷藏可過夜
長時間則學(xué)–20℃凍存。避免使用溶血、脂血和黃疸性血樣。
尿樣:
收集24 小時尿樣,記下尿的容量,每升尿添加10 克硼酸作為防腐劑,充分混
勻后–20℃凍存。使用前,室溫融化樣本并充分混勻。
檢測過程:
成功使用該藥盒,必須*理解該部分內(nèi)容,嚴(yán)格按照文中所述,仔細(xì)操作
實驗每一步以獲得可靠結(jié)果。藥盒各部分都作為整體單位使用。許多部分單個測
定不能混用。不能使用過期藥盒。每一次檢測都必須做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。
未提供需自備的材料:
1. 恒溫水浴鍋,37±2℃
2. 10μl 吸管
3. 1.0ml 半自動吸管
4. γ-計數(shù)儀
5. 檢測用試管架
6. 抽水器(可選)
7. 渦旋混勻器
8. 吸紙(可選)
尿樣檢測時使用的材料:
1. 隨時可用的玻璃試管(12×75mm)和試管帽
2. 二氯甲烷(二氯甲;美國化學(xué)學(xué)會分析試劑等級)
3. bin壺
4. 100μl 、200μl 吸管
5. 通風(fēng)櫥或通風(fēng)良好的工作區(qū)
6. 蒸發(fā)二氯甲烷,其意義在于產(chǎn)生一股干燥的空氣或氮氣是提取物緩緩升溫
至37℃
尿樣提取過程
該過程包括監(jiān)測二氯甲烷抽取效率的方法。在INCSTAR 實驗室里,典型
的尿樣中回收皮質(zhì)醇為99±14%
1. 在壺里放一個適當(dāng)?shù)亩燃淄槿萜魇怪鋮s,每管許可放1ml。壺應(yīng)
足夠大以容納二氯甲烷的燒杯和提取血樣試管的架子
2. 為檢測提取效率,用病人的標(biāo)簽給每個試管做標(biāo)記,一管標(biāo)上“S”(樣本),
另一管標(biāo)上“E”(提取效率)
3. 分別向“S”管和“E”管加入200μL 24 小時尿樣
4. 只向”E”管加10μl 濃度為60μg /ml 24 皮質(zhì)醇血清標(biāo)準(zhǔn)CA-2372,震蕩
試管架,混勻試劑或每管單獨混勻。
5. 向各個“S”管和“E”管加上1ml 冷卻的二氯甲烷,充分渦旋混勻,提
取皮質(zhì)醇到有機(jī)層,蓋上帽或放在壺里以避免二氯甲烷過渡蒸發(fā),為更
好的用吸管轉(zhuǎn)移乙氯甲烷,在轉(zhuǎn)移前,用冷的二氯甲烷清洗試管3~4 次
6. 等待分離的這段時間里,給每個“S”管和“E”管標(biāo)記好兩個皮質(zhì)醇包
被管.
7. 分離階段后,仔細(xì)小心的從每管有機(jī)層(二氯甲烷)底部吸取100μl 并
加到標(biāo)記好的包被管中,吸取樣本前,用冷的二氯甲烷沖洗吸管頭,將吸
管頭樣本的滲出量減到zui小,轉(zhuǎn)移100μl 提取液時,不要試圖擦拭吸管
頭,否則會因二氯甲烷的特性會引起吸管頭部溶液產(chǎn)生氣泡
小心的向包被管轉(zhuǎn)移提取液,用一只手抓住包被管和提取管,快速小心的
吸取100μl 至包被管的底部
8. 伴隨著一股干燥的空氣和氮氣,二氯甲烷從包被管底部蒸發(fā),提取物緩緩
升溫至37℃
警告:工作區(qū)避免過多霧狀鹵化烴產(chǎn)生
提取只能在通風(fēng)處或通風(fēng)良好的工作區(qū)進(jìn)行
9. 二氯甲烷蒸發(fā)后,向每個帶病人樣本的包被管(“S”管和“E”)加入
10μl 皮質(zhì)醇血清空白,CA-2367,以使每個樣本都包括適當(dāng)水平的蛋白質(zhì)
10. 有檢測過程的*步繼續(xù)放免操作
檢測過程:
包括繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,從曲線上可查得未知樣本皮質(zhì)醇的含量
1. 將所有試劑恢復(fù)到室溫,使用前充分混勻.,不可有氣泡產(chǎn)生
2. 將標(biāo)記好的包被管按如下所述安置??偣埽═1,T2)和B0 管(1,2)對
于確鑿的數(shù)據(jù)變化和質(zhì)控程序是必需的,但如果在半對數(shù)繪圖紙上作標(biāo)
準(zhǔn)曲線,二則是可省略的
3. 加樣至包被管底部
a. 10μl 皮質(zhì)醇血清空白,或每個血清皮質(zhì)醇標(biāo)準(zhǔn)
b. 加10μl 樣本(血清、血漿和非提取尿樣),仔細(xì)小心的吸取標(biāo)準(zhǔn)
樣本。
c. 對于提取尿樣,使用包被管,管中含有經(jīng)過9 步尿提取操作而得的
提取尿
注:若要求稀釋病人血清或血漿樣本,藥盒提供的皮質(zhì)醇血清空白
可作稀釋劑,提取和非提取尿樣可用蒸餾水稀釋,對于尿游離
皮質(zhì)醇吸取200μl 稀釋尿樣(尿提取過程步驟3),常規(guī)檢測
繼續(xù)進(jìn)行,計算結(jié)果應(yīng)將稀釋因素考慮進(jìn)去。
4. 每管加入1.0ml 標(biāo)記-緩沖混合液,低速渦旋混勻。
5. 水浴鍋中37±2℃溫育45 分鐘。
6. 除總管外,吸出或傾析所有試管
若用抽吸技術(shù),一定要將吸管的塑料頭接觸到包被管底部將液吸出
若用傾析技術(shù),允許將試管傾倒3~5 分鐘排液,試管向上前在試紙上輕
呵試管,移出粘附液體。
7. 所有管在γ-計數(shù)儀上計數(shù)1 分鐘(注意測的是125I )
8. 計算、提交結(jié)果
插圖略
標(biāo)準(zhǔn):
本藥盒中的皮脂醇標(biāo)準(zhǔn)都對照美國提及的皮脂醇標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了校
準(zhǔn)。其他產(chǎn)品和過程都是以該標(biāo)準(zhǔn)作對照。
質(zhì)控
每個實驗室都應(yīng)采用不同濃度的質(zhì)控監(jiān)控檢測進(jìn)行。質(zhì)控品應(yīng)按未知
樣本來對待,保持質(zhì)控記錄。哥哥實驗室都應(yīng)確定自己的質(zhì)控。
結(jié)果
未知血清、血漿和未知尿樣可同時檢測,用內(nèi)插法從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出
結(jié)果,標(biāo)準(zhǔn)曲線由皮脂醇標(biāo)準(zhǔn)品繪制。非提取尿皮脂醇樣本(UC)和提取尿
游離皮質(zhì)醇樣本(UFC)在用公式換算到“μg /24hr”
1. 記錄各管的每分鐘計數(shù)(CPM)
2. 皮質(zhì)醇標(biāo)準(zhǔn)品計數(shù)為縱坐標(biāo),以相對應(yīng)的皮脂醇濃度為橫坐標(biāo),在半
對數(shù)繪圖紙上制圖
3. 畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線,例子見表1 和圖1
4. 確定每個樣品各管計數(shù)在縱坐標(biāo)上的位置,畫一條水平橫線與標(biāo)準(zhǔn)曲
線相交,在這個交點,讀出相對應(yīng)的橫坐標(biāo)上的皮脂醇濃度。(μg /dl)
非提取尿皮脂醇:
將非提取尿樣的皮脂醇濃度(UC)從μg /dl 換算到μg /24hr,使用如下公
式:
S×V
UC= ———
100
S:非提取尿樣濃度(μg /dl)
V:總尿容量(ml/24hr)
100:換算因子
提取尿游離皮質(zhì)醇:
將UFC 從μg /dl 換算到μg /24hr,使用如下公式:
S×V
UFC= —————
33.3(E-S)
S:提取尿樣濃度(μg /dl)
E:符合樣效率管的濃度(μg /dl)
V:總尿容量(ml/24hr)
33.3:結(jié)合了稀釋和提取因素的換算因子
對于每個實驗室來說,都希望監(jiān)控尿提取過程(EE)的效率,按下面公
式計算出效率的百分比
E-S
EE= ———×100
6.0
S:提取尿樣濃度(μg /dl)
E:符合樣效率管的濃度(μg /dl)
6.0:“S”管和“E”管濃度間的預(yù)期差值
100:換算因子
單位
把血清標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控和病人樣本(血清和血漿)值乘以27.59(見表1 所列
皮質(zhì)醇標(biāo)準(zhǔn)的兩種單位值),使用362.5 道爾頓分子量,從μg /dl 換算到單
位nmol/ml。同樣,提取和非提取尿質(zhì)控和病人值乘以2.76,將μg /24hr 換算到
單位nmol/24hr .
過程的局限性
過程中
標(biāo)記-緩沖混合液必須避光保存。包被管又接收至使用前應(yīng)2~7℃保存,保存未
用管時應(yīng)將塑料包裝安全的封閉好,以防止冷凝現(xiàn)象。
溫育條件應(yīng)按照程序檢查,水域鍋溫度必須保持在37±2℃,而且水面要高于試
管內(nèi)溶液,但不可淹沒試管。
操作者應(yīng)注意到錯誤結(jié)果可能由不正確貯藏和處理樣本所致,避免使用溶血、脂
血和黃疸性血樣。
未能獲得正確的質(zhì)控皮質(zhì)醇濃度意味著操作不、處理不當(dāng)或試劑變質(zhì)。每次
檢測都要作質(zhì)控,每次檢測都要繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
本藥盒不能用于測定正在用氫化潑尼松治療的病人的血清(參見闡述)
闡述
總的來說,皮質(zhì)醇水平上午5~10 點zui高,下午8 點至凌晨4 點zui低。上午水平
通常是下午水平的1/2 或1/3。女性一天中皮質(zhì)醇水平的變化,攝入食物時升高
而喪失食物時顯著減少,這一點已有所描述。晝夜變化,刺激和抑制試驗、各種
壓力都會使皮質(zhì)醇濃度發(fā)生變化,例如:甲狀旁腺激素刺激會使皮質(zhì)醇濃度升至
上午水平的2~3 倍。甲毗酮或地塞米松抑制會使上午水平不超過5μg /dl。雌激
素作為口服孕藥會引起血漿或血清蛋白中皮質(zhì)醇水平升高。因此,每個病人的
皮質(zhì)醇值以他/她上午皮質(zhì)醇水平為準(zhǔn)。
正常參數(shù)值
血漿或血清水平
早晨:7~25μg /dl 獲70~250ng/ml (193~690nmol/ml)
晚上:2~9μg /dl 獲20~90ng/ml (55~248nmol/ml)
在每個實驗室確立自己的正常范圍前,這些范圍作指導(dǎo)用。
非提取尿皮質(zhì)醇:
非提取尿樣的尿皮質(zhì)醇的正常范圍為75~270 μg /24hr(207~745nmol/24hr)。尿
樣收集不當(dāng)可導(dǎo)致錯誤的病人結(jié)果,建議測定肌酸酐以鑒別尿樣收集是否合適。
提取尿樣游離皮質(zhì)醇
尿游離皮質(zhì)醇的正常范圍為20~80μg /24hr 皮質(zhì)醇(55~248nmol/24hr)。尿樣收
集不當(dāng)可導(dǎo)致錯誤的病人結(jié)果,建議測定肌酸酐以鑒別尿樣收集是否合適。
靈敏度:zui低可測濃度為0.21μg /dl
親和力:皮質(zhì)醇抗血清的親和常數(shù)近似為2×108 liter/mol
特異性:如下化合物使用皮質(zhì)醇放射免疫法測定其交叉反應(yīng),是皮質(zhì)醇濃度恰
為抑制50%時,比較各類混合物的交叉反應(yīng)。
化合物%交叉反應(yīng)
皮質(zhì)醇100
潑尼松77
6-甲強的松龍43
11-脫氧皮質(zhì)醇6.3
17-烴孕酮1.2
皮質(zhì)酮<0.4
地塞米松0.2
氫化潑尼松0.2
脫氫皮質(zhì)酮0.1
四氫皮質(zhì)酮0.1
醛固酮<0.1
可的松<0.1
雙氫皮質(zhì)酮<0.1
孕酮<0.1
四氫皮質(zhì)酮<0.1
6-β-皮質(zhì)醇<0.1