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Triton-NH4OH細(xì)胞裂解液配制方法配制方法詳細(xì)介紹

更新時間:2019-04-29   點擊次數(shù):3015次

Triton-NH4OH細(xì)胞裂解液(Triton-NH4OH Lysis Buffer)經(jīng)過優(yōu)化配方,在裂解無核紅細(xì)胞的同時幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。本裂解液經(jīng)過濾除菌,經(jīng)過Triton-NH4OH Lysis Buffer處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。


Triton-NH4OH細(xì)胞裂解液配制方法配制方法詳細(xì)介紹:

中文名:Triton-NH4OH細(xì)胞裂解液

供應(yīng)商:信帆生物

規(guī)格:100ml

分類:細(xì)胞組分分離

保存:4℃,6個月

用途: 裂解細(xì)胞獲得細(xì)胞外基質(zhì)

說明:主要由0.5%TritonX-100、20mMNH4OH、PBS組成

適用范圍:限于科研,實驗,不作
Triton-NH4OH細(xì)胞裂解液操作步驟:

1.制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液,離心棄上清。

2.裂解: 加入3~5倍細(xì)胞沉淀體積的Triton-NH4OH Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

3.離心: 4℃,離心5min,棄紅色上清。如無低溫離心機(jī),本步驟亦可在室溫下操作。

4.如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。

5.洗滌:根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃,離心2~3min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。

6.如有必要,重復(fù)上述步驟5一次,共洗滌1~2次。

7.根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

 配制方法:

1.收集胰蛋白酶消化的細(xì)胞并離心,用PBS清洗。

2.用100μl RIPA緩沖液冰浴溶解沉淀10min(每500000個細(xì)胞20μl RIPA緩沖液)。

3.10000rpm,4℃離心10min,取上清轉(zhuǎn)移至新管。

4.用考馬斯亮藍(lán)法檢測蛋白質(zhì)濃度。

5.用裂解緩沖液將溶液濃度調(diào)到5mg/ml,每小瓶中放100μl,-80℃儲存。

6.按照1:1體積比混合2×樣品緩沖液,煮沸5min后,室溫放置5min.

7.短時離心后點樣電泳檢測。


配制方法注意事項:

1.制備細(xì)胞懸液時應(yīng)根據(jù)實驗需要,不一定要制備成單細(xì)胞懸液。

2.后續(xù)試驗如果是用于細(xì)胞培養(yǎng),操作過程中應(yīng)注意無菌操作,盡量在超凈工作臺內(nèi)操作。

3.離心步驟盡量在4℃離心機(jī)上操作。

4.常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于:常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心,可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好,不需要大體積的離心管;快速步驟少了一次離心過程,洗滌效果略差一些,同時需要大體積的離心管。

5.離心洗滌后,通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的檢測。

6.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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