蛋白快速銀染試劑盒操作步驟
更新時間：2019-01-03 點擊次數(shù)：1233次蛋白快速銀染試劑盒操作步驟
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自備材料：
1、水平搖床或側(cè)擺搖床
2、去離子水(超純)
3、乙醇、冰乙酸
1、準(zhǔn)備工作：以下操作以 8.5×5.5cm、厚度為 1.0mm 的凝膠為例，以凝膠全部浸沒到溶
液為準(zhǔn)，一般用量是 25ml，對于凝膠體積的，各溶液的使用量需按凝膠體積比例
放大。整個銀染過程應(yīng)在搖床上進行，搖床轉(zhuǎn)速控制在 60～70rpm。提前配制固定液，
即按無水乙醇:冰乙酸:去離子水=5:1:4 的比例配制。提前配制洗滌液，即按無水乙醇:去
離子水=1:4 的比例配制。
2、水洗：電泳結(jié)束后，取凝膠放入去離子水中清洗 2 次，每次 5min。
3、固定：取凝膠放入 50～100ml 固定液中，在搖床上室溫搖動 15～20min，重復(fù)固定步
驟 1 次
4、洗脫：取凝膠放入洗滌液中清洗 2 次，每次 5min。
5、水洗：去離子水清洗凝膠 2 次，每次 5min。
6、增敏：配制銀染增敏工作液，即取 Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml 加入到 50ml
去離子水中，混勻，即1×Silver Stain Sensitizer，一般應(yīng)2h內(nèi)用完。室溫下用1×Silver Stain
Sensitizer 孵育凝膠 2min，立即用去離子水清洗凝膠 2 次，每次 1min。
7、銀染：配制銀染工作液，即取 Silver Stain(100×)0.5ml 加入到 50ml 去離子水中，混勻，
即得 1×Silver Stain，一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完。取凝膠入 1×Silver Stain，在搖床上室溫搖動 10～
20min。
8、水洗：棄液，在搖床上用去離子水清洗凝膠 2 次，每次 30s，搖動速度在 60～70rpm。
總的水洗時間應(yīng)控制在 1.5min 內(nèi)。
9、顯影：配制銀染顯影工作液，即取 Silver Stain Developer(5×)10ml 加入到 40ml 去離
子水中，混勻，即 1×Silver Stain Developer，一般應(yīng) 30min 內(nèi)用完。清洗凝膠后，立即
置于 1×Silver Stain Developer 中，室溫孵育 2～10min，直至蛋白條帶清晰可見。一般
顯色 30s 后就會出現(xiàn)棕色沉淀，繼續(xù)顯影 2～3min，亦可延長至 5min 以上，如果顯影效
果不佳，可重新更換 1×Silver Stain Developer 繼續(xù)顯影。
10、迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過度，背景染色。立即加入銀染終止液，搖床上
搖動 10min，以終止顯色反應(yīng)。(配制銀染終止液，即取 Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml
加入到 90ml 去離子水中，混勻，即 1×Silver Stain Stop Buffer，一般應(yīng) 24h 內(nèi)用完。)
11、保存：棄終止液，加入去離子水 50ml，搖床上搖動 2～5min，棄液。短期保存于新鮮
去離子水，保存可以制備干膠。
蛋白快速銀染試劑盒操作步驟
