上海信帆生物告知您：PCR實(shí)驗(yàn)中DNA的提取方法
更新時(shí)間：2018-06-12 點(diǎn)擊次數(shù)：2075次上海信帆生物告知您：PCR實(shí)驗(yàn)中DNA的提取方法
我們?cè)谧鯬CR實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，經(jīng)常需要用到DNA提取或者RNA提取，今天就讓我們來了解一下DNA提取方法。
DNA 提取方法（以酵母為例，其余參照相關(guān)說明書）
使用試劑：基因組 DNA 提取試劑盒（GENEray）：細(xì)胞組織（GK0120)、血 液（GK1041)、細(xì)菌（GK1071)、酵母（GK1091)
1. 取 1-2ml 過夜培養(yǎng)的酵母菌液，加入至 1.5ml 離心管中，室溫 8,000rpm 離 心 1 分鐘，盡量吸除上清，收集菌體。
2. 向菌體中加入 200ul LysisY Buffer， 加入 5ul Lyticase, 充分混勻，30℃溫育
30min。
3. 8,000rpm 離心 5min，棄上清，收集沉淀。
4. 向沉淀中加入 200ul TE 溶液重懸沉淀，充分混勻。
5. 在 200ul TE 懸浮樣品中，加入 300ul Digestion Solution，混勻；加入 4ul RNase A 混勻，55℃保溫 10 分鐘；再加入 4µl Proteinase K， 55℃保溫 10～30 分 鐘。
6. 依次加入 300ul Ext 溶液和 300ul PB 溶液，充分搖動(dòng)混勻，12000rpm 室溫 離心 5 分鐘，溶液將分為上下兩層，上層溶液為藍(lán)色，基因組 DNA 存在于 下層溶液中，兩層中間可能會(huì)有一些沉淀物。然后用 1ml Tip 頭伸到下層， 將下層中溶液全部轉(zhuǎn)移到套放于 2ml 收集管內(nèi)的 GenClean 柱中，注意盡量 不要吸到上層溶液和中間層沉淀。
注意：此步驟加入 Ext 和 PB 溶液后，一定要充分搖勻，否則后面離心時(shí)雜 質(zhì)不容易分層。
7. 8,000rpm 室溫離心 1 分鐘。取下 GenClean 柱，棄去收集管中的廢液。
8. 將 GenClean 柱放回收集管中，加入 500ul Wash Solution，8,000rpm，室溫 離心 1 分鐘。取下 GenClean 柱，棄去收集管中的廢液。
9. 重復(fù)步驟 8 一次。
10. 將 GenClean 柱放回收集管中，12,000rpm，室溫離心 1 分鐘，以去除殘留 的 Wash Solution。
11. 將 GenClean 柱放入新的潔凈的 1.5ml 離心管中，在 GenClean 柱中央加入
50～100ul Elution Buffer，室溫或 37℃放置 2 分鐘。
12. 12,000rpm，室溫離心 1 分鐘。離心管中的液體即為基因組 DNA。根據(jù)用途，樣 品可以 4℃或-20℃保存。
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