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ECL化學發(fā)光檢測試劑盒超贊

更新時間:2017-11-16   點擊次數(shù):887次

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產(chǎn)品內(nèi)容:
1. 封閉試劑:30g(可配制400ml)。
2. 10 倍濃縮抗體稀釋液,50ml。
3. HRP 標記二抗,0.3ml,效價1:500-1000。
4. ECL 顯色液,25mlA+25mlB。

產(chǎn)品簡介:
SDS-PAGE電泳后,蛋白質(zhì)按照分子量大小分離,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)后,固相載體
以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶標記的第二抗體起反應,加入發(fā)光底物后,能讓膠片感光。經(jīng)顯影和定影后,可以在膠片上顯示出條帶(抗原所在位置)。

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操作步驟:(僅供參考)

常規(guī)電泳轉(zhuǎn)膜后:

1) 清洗轉(zhuǎn)印膜:將膜剝離下后,作好標記,一般在左上角剪一缺口。室溫用TBS-T 漂洗3 次每次5min,以盡量洗去轉(zhuǎn)印膜上的SDS,防止影響后面的抗體結(jié)合。

2) 按5g 封閉試劑加100ml 雙蒸水計,配制膜封閉液,配好的膜封閉液為乳白色懸液,將漂洗過的轉(zhuǎn)印膜放入封閉液內(nèi),置搖床孵育,室溫封閉30min。用TBS-T 緩沖液(PH7.6)洗膜,室溫漂洗3 次每次5min。

3) 將10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成1×(10ml 10×抗體稀釋液加入90ml 雙蒸水,混勻,可4℃保存三個月)。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。

4) 用1×的抗體稀釋液稀釋一抗。根據(jù)用量以及一抗的稀釋濃度來稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中,加入一抗工作液,封口,4℃孵育過夜或37℃搖動孵育2h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。注:如果所加一抗不同,可在此步將膜沿電泳方向剪成條,分別作好標記,分開孵育。

5) 用TBS-T 緩沖液(PH7.6)洗膜,室溫漂洗3 次每次5min。

6) 用1×的抗體稀釋液稀釋二抗。根據(jù)用量,按10ml 抗體稀釋液加入15ul HRP 標記二抗的比例,配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中,加入二抗工作液,封口, 37℃搖動孵育1h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。

7) 用TBS-T 緩沖液(PH7.6)洗膜,室溫漂洗3 次每次10min。

8) 根據(jù)用量,取ECL 發(fā)光液A、B 等量混勻,加在膜正面,暗室顯色1-5 分種。傾去顯色液,小心用紙吸去顯色液,在上面蓋一層平整的透明紙。再取出感光膠片,做好標記,輕輕的放在膜上,顯色30 秒到1 分鐘,取出膠片浸入顯影液中,觀察顯se情況,再放入定影液中1 分鐘。根據(jù)條帶強弱,再次感光時可減短或者加長感光時間(從5 秒到30 分鐘)以期達到理想結(jié)果。

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