人白細胞介素4（IL-4）elisa試劑盒試驗條件選擇
更新時間：2017-05-23 點擊次數(shù)：1023次人白細胞介素4(IL-4)elisa試劑盒簡介
IL-4
結(jié)構(gòu)：人和小鼠的IL-4CDna均已克隆成功，并獲得了相應(yīng)的重組產(chǎn)品。成熟IL-4分子量為18～19KD的糖蛋白。
功能：主要由Th2細胞、肥大細胞及嗜堿性粒細胞產(chǎn)生（IL-4由抗原或絲裂原刺激的CD4+T細胞產(chǎn)生，活化的肥大細胞亦可產(chǎn)生IL-4。）。能夠促B細胞增殖、分化；誘導(dǎo)IgG1 和IgE產(chǎn)生；促進Th0細胞向Th2細胞分化；抑制Th1細胞活化及分泌細胞因子；協(xié)同IL-3刺激肥大細胞增殖等。IL-4的生物學(xué)活性包括以下幾個方面：①促使抗原或絲裂原活化的B細胞分裂增殖，但其作用遠弱于IL-2；然而IL-4能促使靜止的B細胞表達MHCⅡ類分子，增強B細胞的抗原遞呈能力，因此曾稱為B細胞刺激因子。IL-4是Ig重鏈基因類轉(zhuǎn)換的主要調(diào)節(jié)因子，能促使B細胞表達和分泌IgE。此外，IL-4還能誘導(dǎo)B細胞表達低親和力fc受體。②象IL-2一樣，IL-4也是CD4+T細胞的自分泌性生長因子；此外，IL-4還能促進tc細胞的活性。③IL-4不能刺激巨噬細胞增殖，但可增強巨噬細胞的功能；巨噬細胞受刺激后Ⅱ類抗原和fcγr的表達量均明顯增加；同時巨噬細胞遞呈抗原的能力及對腫瘤細胞的細胞毒素作用也顯著增強。④IL-4與IL-3協(xié)同可維持和促進肥大細胞的增殖，在某些起敏反應(yīng)性疾病發(fā)生中具有一定的意義；可與CSF協(xié)同作用，促進骨髓造血前體細胞的增殖，誘導(dǎo)髓樣細胞定向分化；誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞表達血管細胞粘附分子-1（VCAM-1），對淋巴細胞的遷移具有一定意義。
人白細胞介素4(IL-4)elisa試劑盒試驗條件選擇
（1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
?。?） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。
（3） 酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
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