上海信帆生物：把細胞計數交給默克 把實驗時間留給文獻
更新時間：2016-05-21 點擊次數：1333次血球計數板的發(fā)明已經有超過100年的歷史了，*，這種傳統的細胞計數方法雖然廉價，但卻很費時費力。其實，除了這點以外，使用血球計數板進行細胞計數還有許多可變的因素，使計數結果波動，可能會大大影響我們的實驗。
首先，由于使用的是顯微鏡肉眼觀測計數，人為的因素多，使計數結果不準確，誤差大。尤其是經過了一整天繁重的實驗后進行計數，或需要同時對上樣的多種樣品進行計數時，容易使人頭昏眼花，結果的準確性更難保證。
第二，重復性差導致實驗結果可信度低。大家進行細胞實驗時，經常需要進行3次以上的平行實驗，以驗證實驗結果的可重復性和可信度。有時候是同一個操作者分別在幾天重復同一實驗，有時候是不同操作者重復同一實驗。同一操作者細胞計數的重復性不會太好，不同操作者細胞計數的重復性就更差了，這會導致上樣量的波動，使得平行實驗的結果CV值增高，可信度降低，在發(fā)文章的時候達不到評委的要求，實驗結果有被挑戰(zhàn)，要求重做或補做實驗，或被退回的可能。
第三，需要合適的稀釋倍數。稀釋不夠，細胞太濃，不僅數的時間很長，還會導致數得眼花，數著數著就忘記哪些已經被數過，容易數錯。稀釋過度，細胞太稀，會使細胞分布不均勻，計數的結果代表性下降，誤差增大。一般來說，使得稀釋后的細胞在1x105-1x106/mL濃度范圍內，使標準計算5個方格共會數到50~500個細胞。這個濃度范圍很窄，這就要求我們在稀釋細胞前能較好地估計原始樣品的濃度，但很多時候都是很困難的。
第四，由于血球計數板使用的是抽樣計數的原理，抽樣計數時幾個細胞數目的誤差，會導致原始樣品的細胞數目的變化被極快地放大。若原始樣品的細胞濃度為2x106/mL，稀釋5倍后，血球計數板5個標準方格共會數到200個細胞，若每個方格不小心少數了3、4個細胞，則計算出來的zui終濃度為1.82x106/mL，會導致原始樣品的濃度產生180,000個/mL的差異。（同樣是原始濃度為2x106/mL的細胞樣品做5倍的稀釋，Scepter 計數的是50µL稀釋樣品中的全部細胞的數目（即2x104個細胞），因此能更準確、更地計數。）
還有，對于壓線的細胞的計數與否需要遵循前后一致的原則（一般只計數大方格的上方和右方線上的細胞），這需要計數時提高熟練程度，才能提高重復性。
血球計數板升級替代方案
可能不少老師和同學都不知道，血球計數板是由法國科學家Louis-Charles Malassez于19世紀研發(fā)，用于血細胞計數，因此而得名。這項古老而又傳統的技術一直沿用至今，但并未隨著科研進步而發(fā)展，還給越來越多的研究者帶來很多困擾。
升級是硬道理
古語：“工欲善其事，必先利其器”。小米加能獲得抗戰(zhàn)勝利，但恐怕難以贏得現代戰(zhàn)爭。細胞研究應是同理，如今技術革新已推進到了流式細胞術，然而國內多數實驗室尚不能負擔的起巨大的投入，或許小型細胞計數/分析設備是多數實驗者的。
市場上常見的自動細胞計數器，其主要可分為兩類：基于圖像的細胞計數器(Automated vision-based counter)和基于庫爾特電阻抗原理的細胞計數器（Scepter為代表），兩者原理及操作方法大相徑庭。以下報告將從性、可靠性、便捷性等方面進行比較，希望能對廣大細胞學研究者有所助益。
【準確性比較】
圖1. 不同細胞濃度下各種細胞計數器的計數結果與實際數值的對比
上圖可見：血細胞計數板在高細胞密度時，計數結果與實際細胞密度有偏差，而基于圖像的細胞計數器則在多個濃度下均有偏差。這表明基于庫爾特原理的細胞計數方法在計數準確性上優(yōu)于其他兩種細胞技術方法。（樣品為常見的COS7細胞）
【可靠性比較】
圖2. 不同細胞濃度下細胞計數的可重復性比較
上圖可見：Scepter的可重復性均明顯好于血細胞計數板和基于圖像的細胞計數器。（樣品為19種細胞系）
elisa試劑盒，人血清，放射免疫試劑盒，PCR代測，WB代測，放射免疫代測，進口ELISA試劑盒，酶聯免疫代測，酶聯免疫試劑盒，染色液-上海信帆生物
上圖可見：傳統的血細胞計數板的計數時間遠長于其他兩種計數。庫爾特原理計數法與基于圖像的細胞計數法相比，計數速度更為穩(wěn)定，而且計數時間約為后者的一半。Scepter計數時間zui短，平均時間僅為14秒。（樣品為常見的SF9，MCF7，HEK293細胞）
數據來源：血細胞計數板，您還在使用么？
Scepter的人性化設計使得使用者能夠輕易上手，只需要五步：儀器校驗、加載芯片、檢測樣品、卸下芯片、數據分析，操作方法和移液器相同，而且便于超凈臺內操作。
選擇Scepter™手持式細胞計數器
以上可見，在滿足多數研究者基本細胞計數的要求上，手持式細胞計數器Scepter表現zui為優(yōu)異。此外，Scepter強大的數據分析能力也是其另一大特色。Scepter能夠提供細胞直方圖作為細胞計數依據，并且支持離線分析直方圖。通過直方圖可以獲知細胞直徑分布、細胞狀態(tài)、各細胞組分等數據。一次操作，更多的信息量，細胞研究水平因此而更上一層樓。因此，Scepter可以說是血球計數板的升級替代選擇。
索取Scepter產品資料
關于升級產品Scepter2.0：
榮獲諸多獎項的Scepter在2011年升級到了2.0版，新上市的Scepter2.0保留了前代產品直方圖結果顯示、類似移液器的操作、14秒疾速計數等諸多特色，新增如下亮點：擴大了可檢測的細胞粒徑（3-36μm），增強了計數性（在小顆粒物或小直徑細胞上檢測的性增強，CV<5%），同時升級了聯機軟件的功能，提供更加全面的數據分析，使之成為目前市場上小型細胞計數設備的選擇！同時，前代產品仍可以通過聯機升級固件，輕松獲得Scepter 2.0的所有功能，而不影響當前的使用效果！更多詳情請垂詢默克生命科學部-2分機。
活細胞、凋亡細胞計數請選擇Muse™ 新一代智能細胞計數儀
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