上海信帆生物:免疫瓊脂雙向擴散
更新時間:2016-05-13 點擊次數(shù):1143次可溶性抗原與相應(yīng)抗體持異性結(jié)合,兩者比例適當并有電解質(zhì)存在及一定的溫度條件下,經(jīng)一定的時間,可形成肉眼可見的沉淀物,稱為沉淀反應(yīng) (precipitation ) 。沉淀反應(yīng)的抗原可以是多糖、蛋白質(zhì)、類脂等。與相應(yīng)的抗體相比,抗原分子小 ( < 20pm) ,單位體積中所含抗原量多,具有的反應(yīng)面積。為了使抗原抗體之間比例適合,不使抗原過剩,故一般均應(yīng)稀釋抗原,并以抗原zui高稀釋度仍能與抗體出現(xiàn)沉淀反應(yīng)為該抗體的沉淀反應(yīng)效價 ( 滴度 ) 。
瓊脂擴散( agar diffusion )為可溶性抗原與抗體在瓊脂凝膠中所呈現(xiàn)的一種沉淀反應(yīng)。當對應(yīng)的抗原、抗體在半固體瓊脂終相遇,且二者比例適當時,便出現(xiàn)可見的白色沉淀線,這組沉淀線是一組抗原、抗體的特異性復(fù)合物。當瓊脂中有多組不同的抗原、抗體存在時,便各自依其擴散速度的差異,再適當?shù)牟课恍纬瑟毩⒌某恋砭€。因此,瓊脂擴散不僅用于疾病的診斷,更廣泛地用于抗原成分的分析。
免疫瓊脂雙向擴散是將可溶性抗原和抗體分別加到瓊脂板上相應(yīng)的小孔中,兩者各自向四周擴散,如抗原與抗體相對應(yīng),兩者相遇即發(fā)生待異性結(jié)合,并在比例適合處形成白色沉淀線 ( 圖 5-1) 。如果所加抗原和抗體標本中分別含有若干與血清學(xué)反應(yīng)無關(guān)的抗原抗體,則因各種抗原的擴散系數(shù)和各對抗原抗體間的zui適比例不同,以及抗原抗體復(fù)合物所形成的沉淀線具有選擇性滲透屏障作用,擴散后可以形成若干條沉淀線, — 條沉淀線代表一對抗原抗體。因此,通過雙向免疫擴散試驗,用已知抗體 ( 或抗原 ) 檢測未知抗原 ( 或抗體 ) ,可鑒定抗原性物質(zhì)或免疫血清的濃度、純度及比較抗原之間的異同點。
左圖為模式圖,右圖為實際試驗的結(jié)果。上,兩個抗原孔里含有相同的抗原,沉淀線是不分叉的;中,兩個抗原孔里的抗原*不同,沉淀線分叉;下,兩個抗原孔里的抗原部分相同,沉淀線部分交叉。
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