上海信帆生物：免疫組化染色之DAKO EPOS法
更新時間：2016-05-12 點擊次數(shù)：1374次自Nakane(1966)建立了免疫酶標記技術以來，這門技術得到了迅速的發(fā)展。DAKO EPOS的多聚螯合物免疫組化一步染色法，是一種即用型快速而有效的方法，具有更為簡便、更為敏感和高特異性的特點。
1.、材料和方法
(1)材料
均為本院日?；顧z組織共32例，其中肉瘤5例，淋巴瘤7例，上皮癌12例，膠質瘤8例。用10%甲醛固定，常規(guī)脫水、包埋、切片。
(2 )試劑
EPOS-Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100和一抗Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100以及LSABKit(K681)均由DAKO公司生物試劑，廣州基因公司提供。
(3 )方法
LSAB法(略)。
DAKOEPOS法：切片常規(guī)脫蠟至水;3%過氧化氫室溫孵育5min;pbs緩沖液洗3次，每次5min;用DAKO EPOS/Horseradish Peroxidase(HRP)室溫孵育30～60min;PBS緩沖液洗3次，每次5min;DAB顯色，水洗;蘇木素復染、脫水、封片。
2、結果
DAKO EPOS一步法染色結果陽性物質呈棕黃色，LCA定位于細胞膜，Vimentin、Cytokeratin、及S?100定位于細胞漿，蘇木素復染細胞核呈藍色，背景清晰，非特異性染色少，EPOS法與LSAB法比較，不但簡化了操作步驟，而且大大縮短了染色時間，具有更佳的對比度，結果比較如表1所示。
3、討論
DAKO EPOS一步染色法是將特異性抗體和酶標分子結合于柔韌的多聚螯合物，使特異性抗體和檢測系統(tǒng)結合為一種試劑，具有高靈敏性、高特異性、省時、減少處理步驟、重復性好、即用、低背景染色的優(yōu)點。
(1)省時
傳統(tǒng)的PAP、ABC或LSAB法整個染色程序時間在2～3h之間，而DAKOEPOS一步法染色時間只需40min，大大地節(jié)約了時間，而且省去了很多繁瑣的步驟。值得一提的是，利用DAKOEPOS一步法加上微波快速處理，整個染色制片過程僅用10min即可，特別適合于冰凍切片急診手術的鑒別診斷，只需Cytokeratin、LCA、S-100、Vimentin幾種抗體，就可以區(qū)分該腫瘤是來源于上皮、淋巴、神經(jīng)或間葉組織的腫瘤，為手術的進一步進行和及時用藥治療提供了更為可靠的依據(jù)。
(2 )低背景
從表1中可以發(fā)現(xiàn)，DAKO EPOS法染色的背景比LSAB法要低，其原因是前者只要一步即可，HRP直接結合在特異性的抗體上，無需引入橋抗，后者則需要三步，必需借助橋抗的連接且HRP是結合在非特異性的復合物上，染色步驟增多，導致背景染色加深。
(3 )高敏感性和高特異性
不同種系的IgG分子結構是相似的，因此抗一種動物的IgG可能與另一種動物的IgG會引起交叉反應。而DAKO EPOS法將一抗和檢測系統(tǒng)結合為一種試劑，避免了動物間IgG的交叉反應，從而提高了敏感性和特異性。
此外，DAKO EPOS試劑是即用型產(chǎn)品，無需進行稀釋，且以使用方便的滴瓶提供，減少了抗體的污染，更適合在實際操作中的應用。
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