上海信帆生物：水性膠層析改良抗球蛋白試驗方法
更新時間：2016-04-20 點擊次數(shù)：1320次在常規(guī)的抗體篩檢、鑒定以及交叉配血中，要求對具有輸血史、妊娠史及輸過血的受血者和供血者都應做不*抗體檢測;此外對新生兒溶血病、自身免疫性溶血病、藥物免疫溶血性疾病等診斷中，也都要求常規(guī)檢測不*抗體。
抗人球蛋白試驗[anti-human globulin(AHG) test or Coombstest，Coombs T]zui初只用于檢測血清中不*抗體，經(jīng)過發(fā)展后，試管法的Coombs T始用于檢測患者體內(nèi)已經(jīng)結(jié)合了抗體和/或補體的紅細胞。但由于抗人球蛋白與血清中致敏紅細胞的抗體及血清中游離的免疫球蛋白都能結(jié)合，因此在試管法Coombs T時首先要洗滌去除未與紅細胞結(jié)合的游離免疫球蛋白，再加入抗人球蛋白，以避免抗人球蛋白被反應液中非特異性免疫球蛋白中和而出現(xiàn)的假陰性反應。由此導致其操作繁瑣、費時，且一些弱反應抗體不能檢出等缺點，難以滿足血型相容性試驗的時間性要求。
上世紀90年代出現(xiàn)的微柱凝膠抗人球蛋白試驗(microtube gel Coombs test，MG-Coombs T)，因為去掉了洗滌程序，才成為了常規(guī)檢測血型不*抗體的方法;但MG-Coombs T尚存在血液標本中纖維蛋白原易造成假陽性、試劑原材料Sephadex價格高等缺點或問題，此外凝膠卡中的原材料凝膠顆粒多為進口，受少數(shù)公司壟斷，近年來價格越來越高，間接導致檢測成本的提高。這就是為什么MG-Coombs T在未能進一步廣泛推廣的原因。
針對這一難題，中國科學院蘇州生物醫(yī)學工程技術(shù)研究所李勇研究員所帶領(lǐng)的血液免疫學與免疫遺傳學課題組建立了水性膠層析改良抗球蛋白試驗(HCI-Coombs T)方法，通過將含紅細胞和血清的反應液置于水性膠介質(zhì)試管中，低速離心使紅細胞穿過水性膠到達試管底部，而血清中非特異性球蛋白等滯留在水性膠之上，棄去反應液和水性膠介質(zhì)后加入抗人球蛋白試劑，離心后觀察血凝結(jié)果(如圖)。
采用 HCI-Coombs T 的優(yōu)勢在于，通過低速離心后，紅細胞沉降到試管底部，而游離蛋白仍留在水性膠上層，棄去水性膠后即可達到將兩者分離的目的，從而代替經(jīng)典Coombs T中多次洗滌過程，省卻了傳統(tǒng)試管法孵育后需多次洗滌紅細胞的繁瑣程序，減少了傳統(tǒng)試管法試驗可能因為洗滌紅細胞不干凈而產(chǎn)生的假陰性問題，同時避免了微柱凝膠法中纖維蛋白原以及陳舊標本容易出現(xiàn)的假陽性，具有操作簡單快速、準確性高、特異性好、原材料價格便宜等優(yōu)點;而且水性膠介質(zhì)的性質(zhì)受到溫度變化影響較小，同時適用于大量標本的高通量檢測，此外水性膠介質(zhì)用途廣泛，可用于免疫標記技術(shù)(如elisa、免疫熒光、流式細胞法等)中其他顆粒性抗原抗體復合物的分離。
相關(guān)結(jié)果已發(fā)表在2014年《中國輸血雜志》第三期上，并被選為封面文章。從各個選擇的試驗機構(gòu)反饋的信息來看，該診斷試劑檢測方法具有簡單快速、成本低廉、應用廣泛等優(yōu)點，并得到了使用者的認可，目前該研究成果正在進行醫(yī)療器械一類產(chǎn)品的注冊。
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