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上海信帆生物：人血漿中緩激肽的SPE LC-MS

更新時(shí)間：2016-04-13 點(diǎn)擊次數(shù)：1045次

緩激肽是一種含有9種氨基酸的生理和藥理活性肽，由蛋白質(zhì)的激肽基團(tuán)衍生而來(lái)。激肽是可以促使血管舒張、血管通透性增強(qiáng)、一氧化氮釋放和花生四烯酸流動(dòng)的效應(yīng)因子。它是血壓、腎功能和心臟功能的重要調(diào)節(jié)因子，還參與炎癥反應(yīng)。緩激肽可引起血管擴(kuò)張，從而導(dǎo)致血壓降低。

因此，對(duì)這種激素肽的變化進(jìn)行高靈敏度、高選擇性和高準(zhǔn)確度地定量，并將其作為疾病進(jìn)展或藥物治療的評(píng)估指標(biāo)，將會(huì)極為有利。盡管以往都是通過(guò)配體結(jié)合試驗(yàn)(LBAs)對(duì)生物制劑進(jìn)行定量分析，但在過(guò)去幾年中利用LC-MS/MS分析大分子已成為一種趨勢(shì)。這在某種程度上是因?yàn)長(zhǎng)BAs產(chǎn)生顯著的交叉反應(yīng)問(wèn)題并且缺乏標(biāo)準(zhǔn)化。

LC-MS/MS具有多種優(yōu)勢(shì)，例如開(kāi)發(fā)時(shí)間更短、準(zhǔn)確度和精度更高、可重復(fù)進(jìn)樣，并且容易區(qū)分相似度很高的類似物、代謝物或內(nèi)源性干擾物。常見(jiàn)的肽通常難以通過(guò)LC-MS/MS進(jìn)行分析，這是因?yàn)槠洳灰纂x子化以及不易產(chǎn)生理想的碎片離子而導(dǎo)致MS靈敏度較低，從而使得LC和樣品制備方法開(kāi)發(fā)非常困難。由于緩激肽在血漿中的濃度低至pg/mL水平且代謝速度快，在采血和樣品制備過(guò)程中還可通過(guò)蛋白水解人為生成，因此對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確定量相當(dāng)困難。

本研究采用了專門(mén)設(shè)計(jì)的血液收集技術(shù)以防止體外緩激肽的形成，并且利用混合型固相萃取(SPE)和實(shí)心核顆粒色譜柱，zui大限度降低并消除基質(zhì)干擾的同時(shí)提高定量分析的靈敏度。

應(yīng)用優(yōu)勢(shì)

■ 使用CORT ECS™ UPLC^®色譜柱有利于獲得較窄的峰寬、改善靈敏度和分離度，并消除基質(zhì)干擾

■ 采用Oasis^®WCX(一種混合型吸附劑)的SPE方法降低了基質(zhì)干擾并提高了血漿中緩激肽提取的選擇性

■ Oasis μElution96孔板可濃縮樣品，并在zui大程度上減少肽損失，使血漿中緩激肽的檢測(cè)限達(dá)到5 pg/mL

■ 選擇性高的快速SPE提取(<30 分鐘)省去了耗時(shí)的免疫親和純化步驟

■ Xevo^®TQ-S MS可實(shí)現(xiàn)與免疫檢測(cè)方法相匹配的高靈敏度，但與后者相比更加省時(shí)省力

■ 與傳統(tǒng)LBA方法相比更為準(zhǔn)確精密

■ 分析速度快，只需3.5分鐘，大大提高了工作效率

沃特世解決方案

ACQUITY UPLC^®系統(tǒng)

Xevo TQ-S質(zhì)譜儀