丁酰膽堿酯酶(B-CHE)測(cè)定試劑盒的操作過程
更新時(shí)間:2023-12-11 點(diǎn)擊次數(shù):192次丁酰膽-堿酯酶(B-CHE)測(cè)定試劑盒的操作過程
(比色法)
一、測(cè)定原理:
丁酰膽-堿酯酶水解丁酰膽-堿生成膽-堿及乙酸,膽-堿可以與巰基顯色劑反應(yīng)生成 TNB 黃色化合物,根據(jù)
顏色深淺進(jìn)行比色定量,水解產(chǎn)物膽-堿的數(shù)量可以反應(yīng)膽-堿酯酶的活力。
二、試劑組成及配制(50T/24 樣):
試劑一:標(biāo)準(zhǔn)品,粉劑×3 支,4℃保存。
1μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液的配制:取標(biāo)準(zhǔn)品一支加生理鹽水 10ml 混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。
試劑二:底物粉劑×2 支,用時(shí)每支粉劑加生理鹽水 20ml,現(xiàn)用現(xiàn)配,配好后 4℃保存兩周。
試劑三:顯色劑貯備液,3ml×1 支,4℃保存,用時(shí)以生理鹽水 1︰9 稀釋,配成顯色應(yīng)
用液。需多少配多少,也可以一次配成 30ml,避光冷藏。保存期 3 個(gè)月。
試劑四:抑制劑,液體×1 支。打開后可以裝在空的小塑料瓶?jī)?nèi)(附空瓶一只),室溫保存。
試劑五:透明劑,液體 6ml×1 支。室溫保存。
生理鹽水:60ml×2 瓶,室溫保存。
三、操作過程:
1、樣本前處理:
組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下
機(jī)械勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清,即為 10%勻漿上清液;
血清樣本:取抗凝全血 1000~1500 轉(zhuǎn)/分鐘,離心 10 分鐘,取上層血漿。也可測(cè)血清,測(cè)時(shí)將血清(漿)
用生理鹽水 1︰19 稀釋;
全血樣本:取 0.1ml 抗凝全血加生理鹽水至 10ml 按 1︰99 稀釋,取 a ml(一般取 0.1ml)檢測(cè),每個(gè)樣本
取樣前必須充分混勻。
3、參考取樣量:
①、大鼠血清測(cè)試前用生理鹽水 20 倍稀釋,參考取樣量為 30~50μl。
②、10%腦組織勻漿的參考取樣量為 30~50μl。
③、1︰99 稀釋后的全血稀釋液取 0.1ml。
五、本法優(yōu)點(diǎn):
1、靈敏度高。微量樣品即可測(cè)出丁酰膽-堿酯酶的水平。
2、可以分型。另有配套試劑盒可測(cè)乙酰膽-堿酯酶。
3、方法簡(jiǎn)便快速,準(zhǔn)確穩(wěn)定。
4、不需氣相色譜等高級(jí)儀器,只要一般分光光度計(jì)即可。
丁酰膽-堿酯酶(B-CHE)測(cè)定試劑盒的操作過程