信帆生物:人外周血淋巴細胞分離液說明書(FICOLL)的保存條件
更新時間:2023-11-24 點擊次數(shù):226次信帆生物:人外周血淋巴細胞分離液說明書(FICOLL)的保存條件
人外周血淋巴細胞分離液說明書(FICOLL)
規(guī)格:200mL
保存條件:本產(chǎn)品對光敏感,應(yīng)該室溫避光儲存,保質(zhì)期2年。無菌開封后,保存于室溫。
產(chǎn)品簡介:
本產(chǎn)品是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據(jù)血細胞的密度差異(紅細胞和粒細胞密度為1.090g/mL左右;淋巴細胞和單核細胞密度為1.075~1.090 g/mL;血小板為1.030~1.035 g/mL),通過離心使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分離出來。
產(chǎn)品指標:
密度 1.077±0.001g/mL
滲透壓 290~350 mOsm/kg H2O
無菌 0.1μm 濾膜過濾
操作步驟:
1. 取新鮮抗凝全血(EDTA、枸櫞-酸鈉或肝素抗凝均可)或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。
2. 在離心管中加入適量分離液(當稀釋后血液體積小于3mL時,加入3mL分離液;大于等于3mL,加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二,否則會影響分離效果),將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后將血液小心的平鋪于分離液上,因為兩者的密度差異,將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時間較長,在離心之前出現(xiàn)紅細胞成團下沉屬正?,F(xiàn)象。)
3. 室溫,水平轉(zhuǎn)子500~1000g,離心20~30min(血液的體積越大所需的離心力越大,離心時間越長,最佳的分離條件需摸索,離心轉(zhuǎn)速最大不超過1200g)。
4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層:最上層是稀釋的血漿層,中間是透明的分離液層,血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層,離心管底部是紅細胞與粒細胞。
5. 小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心管中,10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g,離心10min。
6. 棄上清,5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞,250g,離心10min。
7. 重復(fù)步驟6。
8. 棄上清,細胞重懸備用。
分離純度:
使用人淋巴細胞分離液分離淋巴細胞的分離純度大于90%。
注意事項:
a)開封前顛倒混勻,本分離液為無菌產(chǎn)品,為延長分離液保存時間,請在無菌條件下啟封,避免微生物污染。。
b)分離液使用時應(yīng)始終保持室溫(18℃~25℃),如室內(nèi)溫度較低,可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心,可能會導(dǎo)致白膜層中紅細胞污染加重。
c)血液樣本最好為新鮮抗凝血(采血2 h以內(nèi)),為保持淋巴細胞的活性,應(yīng)避免冷凍和冷藏。
d)稀釋血液或洗滌細胞,不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液,其成分會導(dǎo)致血細胞凝集,大大降低細胞得率及純度。
e)部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其帶有的靜電作用,可能會導(dǎo)致細胞掛壁,影響分離效果。
f)血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,可能會影響分離效果,可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間,摸索最佳的分離條件。
g)吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加;吸取過多的血漿層可能會導(dǎo)致淋巴細胞中血漿蛋白及血小板污染。
h)如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng),那在收集血液和分離過程中,注意無菌操作,避免微生物污染。
i)不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同,用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。
信帆生物:人外周血淋巴細胞分離液說明書(FICOLL)的保存條件